Отзывы лак для ногтей ева мозаик: Лак для ногтей Eva Mosaic Fashion Colour — Учебный центр — Курсы в Уфе, Обучение, Повышение квалификации

Содержание

палитра гель-лака «Fashion Colour», отзывы

Недаром считается, что красивый маникюр и прическа могут сделать каждую девушку неотразимой. Красивые и опрятные ногти – это виза в мир успешности и красоты. Редко можно встретить женщин, которые выходят в свет без качественного макияжа и маникюра. Руки женщины всегда на виду и их ухоженность может многое рассказать об их обладательнице. Ухоженные ногти никогда не останутся незамеченными. Они находятся в центре внимания и создают исключительно положительное впечатление об их обладательнице.

Для того чтобы сделать шикарный маникюр, вовсе не обязательно спешить в салон, так как можно поухаживать за своими ногтями прямо у себя дома. В данном случае важно подбирать качественные лаки для создания красивого маникюра.

Отличным вариантом является популярная российская марка Eva Mosaic. Она получила свое признание среди большинства женщин.

О бренде

Eva Mosaic – это популярная компания, занимающаяся производством лаковой продукции и декоративной косметики с начала 2000-х годов. За это время данная косметическая марка смогла зарекомендовать себя исключительно с положительной стороны. Eva Mosaic всегда старается оставаться на вершине модных тенденций.

Фирма следует своим главным правилам успеха. Продукция производится из качественного сырья по приемлемым ценам, ведь, в первую очередь, компания ориентирована на создание косметики, которую смогут приобрести люди со средним уровнем дохода.

Над продукцией бренда постоянно трудятся специалисты самых разных профилей. Их основная задача заключается в совершенствовании технологий и улучшении качества производимых товаров. Вся косметика и лаковая продукция проходят тщательный контроль на каждом этапе производства.

Достоинства

Лак для ногтей Eva Mosaic «Fashion Colour» – прекрасное решение как для повседневной жизни, так и для создания утонченного вечернего образа. Он обязательно должен быть в коллекции каждой любительницы красивого маникюра. Все оттенки отлично выглядят сами по себе, а также прекрасно подойдут в качестве основы для маникюра с наклейками, глиттерами и стразами. Также Eva Mosaic хорошо работает в качестве базы для стемпинга.

Герметичная упаковка флакона небольшого размера не дает средству быстро загустеть. Лак средней консистенции, в меру вязкий, что позволяет ему не растекаться по пальцам и кутикуле ногтей. Он легко распределяется по ногтевой пластине, быстро высыхает и имеет удобную кисть. Первый слой высыхает всего за пять минут, но для получения насыщенного оттенка лучше использовать два слоя. В отличие от первого покрытия, второй слой сохнет дольше – около 20-25 минут. Смывается Eva Mosaic обычной жидкостью для снятия лака без особых трудностей.

Палитра цветов Eva Mosaic представлена большим ассортиментом. Красивые лаки нежных классических оттенков не оставят без внимания ни одну представительницу прекрасного пола. Все цвета можно комбинировать между собой, а их даже самые смелые и оригинальные сочетания будут гармонично смотреться на ногтях.

Многие оттенки Eva Mosaic позволяют использовать финиш с глянцевым блеском. Их покрытие выглядит достаточно плотным при нанесении в два или три слоя и дает ощущение гелевых ногтей. Такой эффект очень красиво смотрится, создавая идеально ровную ногтевую пластину.

В коллекции Eva Mosaic можно встретить бордовые, розовые, зеленые, голубые, ярко-красные, белые оттенки. При покрытии ногтей в два слоя цвета приобретают насыщенность без разводов и проплешин. В зависимости от освещения, лак может менять свой цвет и игриво переливаться. Это касается оттенков с добавлением блесток и микрочастиц. Для лучшего закрепления цвета желательно воспользоваться верхним топовым покрытием, которое продлевает стойкость маникюра и придает ему шикарный глянцевый блеск.

Преимущества лаков Eva Mosaic:

Полукруглая кисть для удобного нанесения лака;
Большой ассортимент оттенков;
Быстрое высыхание лака;
Стойкость;
Зеркальный блеск;
Качественная передача цвета;
Низкая стоимость.

Для девушек, которые любят подбирать цвет ногтей в тон гардеробу и аксессуарам, отлично подойдет лак Eva Mosaic «Fashion Colour». Богатый выбор цветов поможет создавать различные варианты маникюра, которые не успеют быстро надоесть.

Для тех, кому важна именно длительность ношения маникюра, лучше выбрать гель-лак. Его стойкость увеличивается в несколько раз в сравнении с традиционным лаком для ногтей.

Отзывы

Лаки Eva Mosaic очень востребованы среди покупательниц. Они отмечают прекрасное соотношение данной продукции в плане цены и качества.

Многие сходятся во мнении, что все средства хорошо наносятся и достаточно быстро высыхают. Их удобные кисточки с плоским основанием позволяют прокрашивать ногти без пробелов, а аккуратное нанесение лака делает маникюр красивым без размазанных краев на пальцах. Девушки считают, что лак Eva Mosaic лучше красить в два слоя во избежание непрокрашенных полосок и для полноценной передачи цвета.

Большой выбор модных цветов радует своим разнообразием. Ведь в Eva Mosaic можно подобрать оттенок, наиболее подходящий под гардероб и образ в целом. Любительницы нюдовых оттенков найдут для себя большое количество интересных вариантов, а стильные модницы по достоинству оценят яркие цвета и лаки с добавлением красочных блесток.

В видео ниже вы узнаете о лаковых бюджетных находках.

Лак для ногтей Eva Mosaic Fashion Color

Скажу сразу… я лакоманьяк

У меня лаков много, но кабы чем я ногти не накрашу.

Моё знакомство с лаками Eva Mosaic началось как и у всех. Увидела на стенде в рив гош большую палитру цветов. И уже не смогла остановиться. На данный момент у меня 20 лаков данной марки. И я не собираюсь останавливаться)

Я распишу достоинства, недостатки, особенности и стойкость для каждого оттенка. Чтобы у вас сложилось полное представление и вы смогли выбрать свой номер. Так же ниже вы увидите каждый оттенок на ногтях.

Моя коллекция:

Eva Mosaic Fashion Color (11 оттенков)

************************************************************************************************************************************

Самые светлые оттенки:

Eva Mosaic Fashion Color (светлые)

То как я люблю сочетать цвета между собой. (например два пальца можно накрасить более светлым цветом)

Eva Mosaic Fashion Color (мои любимые сочетания)

В моей коллекции имеются так же два цвета с блестками. Мне нравится наносить поверх схожего оттенка: (так же два или один палец)

Eva Mosaic Fashion Color (то какие цвета я комбинирую с блестками)

************************************************************************************************************************************

Обновление от: 18.05.14 Как теперь выглядит моя коллекция:

Как теперь моя коллекция выглядит

************************************************************************************************************************************

Но пока давайте поговорим о самом лаке:

О достоинствах:

Удобная полукруглая кисть.
Большая палитра цветов.
Хорошая передача цвета. Для некоторых оттенков хватает одного слоя.

Спокойно держится в течении 5ти дней. Лишь потом могут появится небольшие сколы.
Быстро сохнет. Не понадобиться даже сушка.
У меня полосят только молочные оттенки (но это норма).
Цена.

О недостатках:

У меня сломалось горлышко. (об этом история ниже)
Цвета могут оказаться хамелеонами.

Фото состава:

Eva Mosaic Fashion Color (состав)

Начнем от светлых к темным цветам.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 054 — молочное очарование:

Оттенок: 054

Оттенок: 054 (два слоя)

Придает ногтям приятный молочный оттенок.
Наносить лучше всего в два слоя иначе немного полосит.

Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Подходит для ежедневной носки.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 034 — нежно-розовый лепесток:

Оттенок: 134

Оттенок: 134 (два слоя)

Придает ногтям слегка розовый оттенок.
С помощью этого можно оттенить желтизну ногтя.
Наносить лучше всего в два слоя иначе немного полосит.
Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Подходит для ежедневной носки.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 066 — голубая лагуна:

Оттенок: 066

Оттенок: 066 (два слоя)

Приятный цвет для весны или лета. (лично я им часто пользовалась прошлым летом)
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 3-4 дней без сколов.
Нашу его под настроение.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 065 — мятное настроение:

Оттенок: 065

Оттенок: 065 (два слоя)

Приятный цвет для весны или лета. (лично я им часто пользовалась прошлым летом тк это был писк сезона)
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 5 дней без сколов.
Этот цвет всегда поднимал мне настроение.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 067 — серый хамелеон:

Оттенок: 067

Оттенок: 067 (два слоя)

Цвет меняется в зависимости от освещения. На солнце он будет серым, а в тени станет коричневатым.
Так же в нём виден мелкий золотистый шиммер.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 4 дней без сколов.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 130 — алые губы:

Оттенок: 130

Оттенок: 130 (два слоя)

Цвет сразу же привлекает к себе внимание, но не пошлит. Так же отдает не в красный, а скорее в малиновый.
Может окрасить кожу при снятии лака. Но не сильно.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Подойдет к вечернему образу или просто для повседневной носки.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 120 — спелая вишня:

Оттенок: 120

Оттенок: 120 (два слоя)

Цвет напоминает запекшуюся кровь. Самый любимый мною из всей коллекции. Тк редко можно найти именно такой удачный оттенок.
Может окрасить кожу при снятии лака. Но не сильно.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Подойдет к вечернему образу или просто для повседневной носки.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 144 — синее небо:

Оттенок: 044

Оттенок: 044 (два слоя)

Цвет ярко синий с примесью фиолетового. (меняется туда обратно от освещения)
Не просто смывается. Но это особенность цвета.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 3-4 дней без сколов.
На особый случай. Такой цвет для меня сложно носить. Подойдет для оформления или для узоров на ногтях.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 141 — зеленые глаза:

Оттенок: 141

Оттенок: 141 (два слоя)

Цвет не зеленый, а скорее с примесью салатового. Не знаю как точнее описать)
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 3-4 дней без сколов. На особый случай.
Так же сложно носить такой цвет. Подойдет для оформления или для узоров на ногтях.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 142, Оттенок: 062 — блестящая вуаль:

— Оттенок: 142

Оттенок: 142

Оттенок: 142, Оттенок: 062 (с базой оттенка 130)

Вот тут я вам расскажу страшную историю)

В тот день когда я фотографировала для отзыва я перекладывала лаки и у меня буквально в руках разбился колпачок. А точнее он остался с кистью. Поэтому я облила стол и руки. Почему это произошло мне не понятно…

Самое обидно что это был мой любимый лак! Я даже не знаю что теперь делать. Выкинуть и купить новый или попробовать перелить. Вообщем я очень расстроена(

Сделает любой лак темнее. Тк имеет свой темный оттенок.
Придает красивое сияние которое не выглядит дешево.
Наносить лучше всего в два слоя чтобы блестки легли лучше и плотнее.
Носится в течении больше 5-6 дней без сколов.
Я добавляю его на один или два пальца.
Легко смывается, но оставляет немного блесток на коже.
Подойдет для оформления или для узоров на ногтях.

************************************************************************************************************************************

— Оттенок: 062

Оттенок: 062

Оттенок: 142, Оттенок: 062 (самостоятельно в два слоя)

Сделает любой лак изящнее и немного светлее.
Придает красивое сияние которое не выглядит дешево.
Наносить лучше всего в два слоя чтобы блестки легли лучше и плотнее.
Носится в течении больше 5-6 дней без сколов.
Я добавляю его на один или два пальца, но и самостоятельно замечательно смотрится.
Легко смывается, но оставляет немного блесток на коже.
Подойдет для оформления или для узоров на ногтях.

************************************************************************************************************************************

Обновление от: 18.05.14

Новые оттенки:

Обновление: 18.05.14

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 176 — Лаванда:

Оттенок: 176

Оттенок: 176 (два слоя)

Приятный цвет для весны или лета. (я активно пользуюсь им этой весной)
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 3-4 дней без сколов.
Отлично сочетается с другими пастельными оттенками.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 177 — Голубое небо:

Оттенок: 177

Оттенок: 177 (два слоя)

Приятный цвет для весны или лета. (я активно пользуюсь им этой весной)
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 3-4 дней без сколов.
Отлично сочетается с другими пастельными оттенками.
Похож на оттенок 066, но у этого голубой подтон.
Этот оттенок пузырится при нанесении топа.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 053 — Суфле:

Оттенок: 053

Оттенок: 053 (два слоя)

Имеет плотный белый цвет. Немного полосит как и все белые.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Подойдет для оформления или для узоров на ногтях.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 069 — Перламутр:

Оттенок: 069

Оттенок: 069 (два слоя)

Трудный лак в нанесение и носке. Имеет перламутровый блеск.
Носится в течении 3-4 дней без сколов.
Подойдет для оформления или для узоров на ногтях.
Наносится полосами поэтому нужно быть очень аккуратным или можно превратить это в дизайн. Например наносить волнами как на безымянном пальце. Получится такой эффект:

Способ нанесения

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 040 — Красное вино:

Оттенок: 040

Оттенок: 040 (два слоя)

Темно-красный оттенок. При снятии очень красит кожу и всё вокруг)
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Подойдет к вечернему образу или просто для повседневной носки.
Так же можно сочетать с следующим оттенком:

Оттенок: 040 и 017

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 017 — Красный мак:

Оттенок: 017

Оттенок: 017 (два слоя)

Темно-красный оттенок с шиммером. При снятии очень красит кожу и оставляет блестки.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Подойдет к вечернему образу или просто для повседневной носки.
Подойдет для акцента к другим лакам.

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 156 — Космос:

Оттенок: 156

Оттенок: 156 (два слоя)

Обалденный глубокий фиолетовый цвет. При разном освещении смотрится темнее или светлее. Актуальный оттенок.
Имеются блестки золотого-розового цвета.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 4-5 дней без сколов.
Крупнее:

Оттенок: 156 (два слоя)

************************************************************************************************************************************

Оттенок: 095 — Темный бархат:

Оттенок: 096

Оттенок: 096 (два слоя)

Очень красивый черный цвет с золото-красный шиммером. Стал моим любимым.
При первом слое отдает в коричневым.
Наносить лучше всего в два слоя для передачи цвета.
Носится в течении 3-4 дней без сколов.
Крупнее:

Оттенок: 096 (два слоя)

20 Оттенок добавлю чуть позже.

************************************************************************************************************************************

Вывод: Замечательный лак. Кто бы что не говорил, но я советую его с полной уверенность. Буду еще добавлять новые оттенки!

Надеюсь мой отзыв был для вас полезен) (названия к оттенкам я придумала сама)

Цена: 79р (в рив гош можно купить еще и со скидкой)

Удачи в экспериментах!)

P.s.: Лак для ногтей Eva Mosaic зеркальное сияние блеск и стойкость маникюра

Лечебная основа под лак- ORLY NAILTRITION — для укрепления слабых ногтей ускорения их роста

Лак для ногтей Essence Essence studio nails pro white effect

Лак для ногтей Eva Mosaic или Zoya — что лучше, цены и отзывы

Сравнение: Лаки для ногтей Zoya или Лак для ногтей Eva Mosaic какие лучше купить, что выбрать, отзывы покупателей

Лаки для ногтей Zoya
Лак для ногтей Eva Mosaic

Лак для ногтей Zoya цены и отзывы

Zoya-Qtica Лак для ногтей №660 «Nyx» 15 мл отзывы покупателей

Оценка: ★★★
Дина
в реальности — он темно-розовый

Оценка: ★★★★★
Дарья

Достоинства: Заказывала лак в цвете №535 «Sarah». Лак шикарный, ложится ровно, кисть очень удобная, состав безопасный. Делала педикюр с ним, держится уже 3 недели.
Недостатки: Крайне редко можно увидеть лаки этой фирмы в наличии.
Комментарий: Буду заказывать ещё, однозначно)

Оценка: ★★★★★
Екатерина Просвирнина

Достоинства: Заказала цвет Zoya-Qtica Лак для ногтей №535 «Sarah» 15 мл. Отличный цвет. Хорошая текстура. Замечательно ложится на ногти.
Недостатки: Нет.
Комментарий: Очень довольна.

Оценка: ★★
Анастасия

Достоинства: Приятный цвет, сахарная текстура
Недостатки: Невозможно равномерно нанести, хотя по консистенции лак довольно жидкий. Проблема в кисточке, она слишком мягкая.

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Zoya Лак для ногтей «Pandora», тон №563, 15 мл отзывы покупателей

Оценка: ★★★★★
Марина
Достоинства: Отличное качество, очень красивый оттенок
Недостатки: Нет
Комментарий: Рекомендую

Оценка: ★★★★★
Марина
Достоинства: Отличное качество, оттенок очень красивый, без вредны добавок
Недостатки: Нет
Комментарий: Хорошие профессиональные лаки

Оценка: ★★★★
Ангелина
1. Цвет лака на самом деле немного темнее, чем на картинке.2. Нет такого как на картинке ярко выраженного металлического блеска3. В один слой «полосит», в два нормально, но на мой взгляд требует топа.4. Сохнет нормально, но могло бы быть и быстрее5. А вот держится хорошо. Три дня точно. Больше не держала, но ничего не откололось и не стерлось, можно было бы еще походить.Итого: Лак в целом не плохой, но на мой взгляд цена за такой лак неоправданно высока. Хотя давно поняла, что нельзя по одному лаку судить обо всей линейке целиком. Жду еще один заказ и тогда точно решу, буду ли дальше пользоваться лаками этой фирмы, пока еще в замешательстве.

Оценка: ★★★★★
Юлия
Единственный минус — это, конечно, цена, но так надоело искать лак, который действительно смотрелся металлом на ногтях. Вот нашла!) Даже во флаконе кажется, будто туда залился сам Терминатор))

Оценка: ★★★★★
Марина Митковская

Достоинства: Красивый цвет, хорошие тх качества
Недостатки: Нет
Комментарий: Этот лак хорош для осени. На солнце это красивый сапфировый цвет. В тени может уходить в чёрный. Хорошо смотрится на ногтях средней длины.

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Zoya Лак для ногтей «Envy», тон №490, 15 мл отзывы покупателей

Оценка: ★★★
Марина
Достоинства: Хорошо держится
Недостатки: Трудно наносится
Комментарий: Долго гонялась за этим лаком. Его так разрекламировали бьюти-блогеры. Честно говоря, я не поняла за что его так любят. Лак очень посредственный. Странно наносится из-за какой-то гелевой текстуры, сохнет не быстро. Правда, держится неплохо. Накрасила им раза 4 и выкинула.

Оценка: ★★★★★
Киселева Юлия
хороший лак легко наносится и держится в один слой довольно таки долго.

Оценка: ★★★★★
Алена
Отличный лак, покрытие даже в 1 слой достаточно плотное, не полосит, наносится легко. Плюсом состав 4 free. Цвет Pasha интересный, не тёмный, с легким, невульгарным перламутром.

Оценка: ★★★★★
Мария
Цвет отличается — на самом деле это неоновый коралл. Очень нравится, педикюр держался две недели без сколов.

Оценка: ★★★★★
Ксения
УфаКрасивый нежный цвет. Смотрите в отзывах, потому что цвет не соответствует картинке. Оказался лучше, чем я ожидала. Кисточка не очень удобная, самая обычная, а я люблю плоские широкие кисточки, как у супервредного лака Eva Mosaic. Там потрясающая кисть.Наносится неплохо, стойкость обычная — два дня. Очень надеюсь, что действительно окажется безвредным и не испортит мои ногти.На ногтях хорошо смотрится, нужно наносить два слоя. Полос нет, по мере высыхания поверхность разглаживается.Очень нежный девичий лак с глянцем.Покупкой довольна. Хотя так и непонятно, тестируют ли они продукцию на животных.

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Лак для ногтей Eva Mosaic цены и отзывы

Eva Mosaic Лак для ногтей Fashion Colour, 6 мл, 049 Черная Ночь отзывы покупателей

Оценка: ★★★★★
Мария

Достоинства: Низкая цена. Быстро сохнет. Лак держится 5 дней на ногтях.
Недостатки: нет

Оценка: ★★★★★
Екатерина

Достоинства: Нормальный лак

Оценка: ★★★★★
Елизарова Мария

Достоинства: Насыщенный цвет, удобная кисточка
Недостатки: Нет
Комментарий: Лак замечательный. Для своей цены очень хороший. Наносится легко, без проблем. Кисточка довольно широкая, мягкая и удобная.

Оценка: ★★★★★
Буланова Юлия

Достоинства: Хороший лак, удобная кисточка, плотное покрытие, низкая цена
Недостатки: Не нашла
Комментарий: Лак понравился, цвет такой, как и искала. За такую цену просто подарок.

Оценка: ★★★★★
Торкунова Анна

Достоинства: Стоимость
Недостатки: Нет
Комментарий: Легко наносится быстро сохнет

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Eva Mosaic Лак для ногтей Fashion Colour, 6 мл, 012 Черничное Мороженое отзывы покупателей

Оценка: ★★★★★
Редькина Анастасия
Достоинства: Понравился

Оценка: ★★★★★
ковтун лариса
Достоинства: низкая цена.прекрасный оттенок
Недостатки: не заметила
Комментарий: лак продержался целую неделю(под закрепителем).очень понравился.кисть удобная и очень универсальный оттенок.присмотрюсь к другим цветам.

Оценка: ★★
Наташа
Цвет отличается от картинки. На самом деле он темнее и менее интересный. И сам лак очень густой и долго сохнет.

Оценка: ★★
Капустина Нина
Цвет отличается от картинки. На самом деле, лак оказался бледно-розовым (тусклым).

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Eva Mosaic Покрытие для ногтей Блеск и стойкость маникюра, 10 мл отзывы покупателей

Оценка: ★★★★★
Воробьева Елена
Достоинства: цена и качество
Комментарий: понравилось, хороший блеск и быстрота высыхания

Оценка: ★★★★★
Агакарян Эдуард Яковлевич
Хорошая. Лак быстро сохнет. Придаёт блеск лаку.хватает на долго

Оценка: ★★★★★
Наталья
Достоинства: Нормальная сушка
Недостатки: Нет
Комментарий: Нормальная сушка. Придает блеск, позволяет высохнуть быстрее лаку, выравнивает и сглаживает лак. Кисточка удобная, мягкая и широкая.

Оценка: ★★★★
Екатерина Хатамова

Достоинства: Нормальная сушка

Оценка: ★★★★
Сокол Валерия
Достоинства: быстро сохнет, сверкает, цена отличная
Недостатки: отслаивается на следующий день, и то в хорошем случае на следующий
Комментарий: Попробую еще поверх лака, но как то пока не оправдал надежды??

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Eva Mosaic Уход для сухих, ломких и слоящихся ногтей, 10 мл отзывы покупателей

Оценка: ★★★★★
Александр Скорняков Юрьевич

Достоинства: супер лак, действительно укрепляет

Оценка: ★★★★★
Бураева Людмила

Достоинства: Быстро сохнет, ногти блестящие
Недостатки: Нет
Комментарий: Хорошее средство для ногтей. Использую в перерывах между наращиванием. Ногти становятся крепче и блестящие!

Оценка: ★★★★★
Полозов Виктор
Достоинства: жене очень понравился, она довольна
Недостатки: нет
Комментарий: советую

Оценка: ★★★★★
Валерия
Достоинства: Как бесцветный лак подойдёт
Недостатки: От ломкости не спасёт
Комментарий: Быстро сохнет

Оценка: ★★
Онежкина Ольга

Достоинства: быстро сохнет
Недостатки: отваливается на следующий день
Комментарий: эффекта укрепления и предотвращения расслоения ногтей не заметила

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Eva Mosaic Лак для ногтей Fashion Color, 6 мл, 340 отзывы покупателей

Оценка: ★★★★
pipa pipa
Достоинства: Лак неплохой. Два нанесения вполне достаточно, чтобы на ногтях выглядел вполне хорошо. Без разводов. Сохнет быстро. Особенно понравилась кисточка — плоская и широкая. Очень удобно наносить.
Недостатки: Не очень стойкий.

Оценка: ★
Светлана Черкесова

Достоинства: Никаких.
Комментарий: Свернувшийся лак. На выброс.

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Лаки для ногтей — популярные сравнения по цене и качеству

Гель лак TNL Mosaic Effect, фото и видео обзор

Мне очень нравятся гель-лаки TNL (Tatnail) за их интересные эффекты, которые не найти у других производителей гель-лаков. Один из таких эффектов – кракелюр – я не так давно показывала на блоге. Здесь я продемонстрирую еще один интересный новый эффект от TNL – Мозаика или Mosaic Effect.

Суть эффекта мозаики в том, что гель-лак на подложке с липким слоем как бы расползается, образуя дырочки и круглые разводы в хаотичным порядке. Для этого эффекта у TNL есть специальная база, однако можно использовать и любой другой гель-лак с липким слоем. Я использовала родную подложку Tatnail и хочу поделиться результатом и своими впечатлениями.

Техника создания покрытия с эффектом мозаики

Выполняется стандартная подготовка ногтей под гель-лак: снимается глянец и наносится обезжиривающее средство. Далее наносится база под гель-лак и полимеризуется в лампе.
Наносится подложка под гель-лак с эффектом мозаики. У меня это TNL. По консистенции это малиновое желе, полупрозрачное, поэтому наносить нужно минимум в два слоя: хоть это и подложка, ее цвет играет немалую роль в создании общего дизайна. Сушится в лампе 2 минуты.
На липкий слой гель-лака наносится тонким слоем гель-лак TNL с эффектом мозаики TNL Mosaic Effect. У меня это красно-оранжевый цвет, который я пыталась подобрать ближе к цвету подложки, но он все равно получился немного не тот, что ожидалось.
Теперь нужно подождать, пока эффект полностью проявится на ногтях (у меня это заняло около 3 минут), после чего зафиксировать его в лампе, заполимеризовав в течение 2-3 минут.
В завершение наносится топ, который также сушится в лампе. Для полного выравнивания поверхности нужно нанести его в два слоя.

Вот краткая видео-инструкция:

В описании все кажется просто, но для достижения желаемого результата нужно немного постараться. Гель-лак с эффектом мазаики необходимо наносить тонким слоем, иначе он не сможет проявиться. Желательно проводить в одном месте один раз. И даже с учетом всего этого, у меня эффект не проявился так, как это должно быть, судя по картинке. Вместо мозаичных конструкций у меня получились только дырочки на гель-лаке. Я пробовала экспериментировать на других гель-лаках подложках, результат был абсолютно аналогичным. Возможно это проблема цвета, но достичь желаемого у меня не вышло.

Если кто-то пробовал такой гель-лак прошу поделиться комментариями или советами по его нанесению. А на этом я прощаюсь, ваша Танюша!

Материалы предоставлены интернет-магазином krasotkapro.ru

Если эта страница была вам полезна, посоветуйте её своим знакомым:

Схожие статьи:

Лак для ногтей Avon: мои отзывы

Сегодня я хочу поделиться своими впечатлениями о лаке для ногтей от компании Avon. Я частенько стала их заказывать, и в моем ридикюльчике накопилось уже приличное количество пузырьков. Самое удивительно то, что марка одна, а качество лаков очень разное. К примеру, больше всех мне понравился лак «Гель-эффект». Итак, начнем от хороших к средненьким.

Отзыв о лаках Эйвон

Лаки Avon из серии «Эксперт цвета»

Темный изумруд (Noir Emerald)

Лак «темный изумруд» мне очень понравился: ложиться ровно, сохнет быстро, держится долго. Достаточно однократного нанесения. При желании можно нанести второй слой, в таком случае покрытие будет более темное и насыщенное.

Оттенок «темный изумруд»

Также понравилось то, что оттенок соответствует тому цвету, который указан в каталоге. Как и заявлено, лак имеет жемчужный перелив. При солнечном свете покрытие на ногтях очень красиво переливается, слегка поблескивает.

Водяная лилия (blue water lilies)

Очень нежный бирюзовый оттенок с серебристым переливом, едва заметным лишь при ярком освещении. Текстура лака, как и в предыдущем случае, хорошая, ложиться идеально. Можно наносить как в один, так и в два слоя. Держится долго, особенно если поверх нанести закрепитель.

Оттенок «Водяная лилия»

Мята (sea breeze)

Мятный цвет в большом почете уже второй год подряд, он присутствует не только на одежде и аксессуарах, но и в декоративной косметике. Мятный лак от Avon получился очень симпатичным, правда, качество его оставляет желать лучшего. Первый слой лака ложиться полосками, покрытие получается полупрозрачное. Картина меняется в лучшую сторону, только после нанесения второго слоя.

Оттенок «Мята»

Отзыв о лаках из серии «быстрый результат» .

Мохито (lime splatter)

Следует отметить, лаки из этой линейки по качеству гораздо хуже предыдущей серии. Однако есть у них плюс – высыхают они действительно быстро. Наносить оттенок «лайм» нужно только в два слоя, желательно использовать закрепитель.

Оттенок «Мохито»

При разном освещении лак приобретает то желтоватый, то зеленоватый оттенок, причем разница очень ощутима, прям хамелеон какой-то.))

Красное вино (red wine)

Этот лак я заказывала из флаера «Распродажи товаров». Сочный глянцевый оттенок, без перламутра, хорошо ложиться, достаточно одного слоя. На ногтях не становиться тусклым, даже через пару дней покрытие выглядит так, будто его нанесли только что. Однако имеется недостаток – долго не держится, поэтому прописываю применять только с закрепителем.

Оттенок «Красное вино»

Сафари (street beige)

Оттенок «Сафари»

Ну, и последний оттенок из линейки быстросохнущих лаков – «Сафари». Как и предшественники из этой же серии, этот лак сильно «полосит». Чтобы маникюр получился более или менее приличным, второй слой лака должен быть достаточно «жирным», только в таком случае краску удастся разместить по ногтю равномерно. Сохнет этот лак быстро, однако носится на ногтях совсем недолгое время.

Обзор

All Over Bronze Glow

Пудра для лица с мозаикой NYC Color Wheel Mosaic: All Over Bronze Glow Review

Здравствуйте, прекрасные дамы,

Надеюсь, у всех у вас все хорошо, и вы наслаждаетесь IMBB. В последнее время я одержим NYX, и поэтому мои последние несколько статей были только о NYX, но теперь я решил, что на некоторое время забуду о NYX и сосредоточусь на некоторых других брендах. На этот раз я буду говорить о пудре для лица из Нью-Йорка. Продукт называется Color Wheel Mosaic Face Powder.У меня их два — один в Pink Cheek Glow, а другой в All Over Bronze Glow. Я уже рассмотрел Pink Cheek Glow, который полностью отличается от All Over Bronze Glow.

Количество:

9 г.

Цена:

4,99 доллара США в США, раньше этот продукт не был доступен в Индии, но несколько дней назад я видел его на веб-сайте, где он был оценен в 530 индийских рупий, а затем цена была снижена до 410 индийских рупий.

Упаковка:

Упаковка товара не очень привлекательная; это самая обычная упаковка с черным дном, в которой находится товар, и прозрачной крышкой.Но об упаковке я хотел бы упомянуть то, что, хотя она очень простая, она прочная. Крышка сделана из толстого пластика, который удобно носить, не боясь сломать (это могу сказать по собственному опыту. Я уже дважды уронил крышку, на крышке нет ни единой трещины).

Ключевые ингредиенты:

Смесь микронизированных пигментов и диоксида кремния для гладкого нанесения.
Каолин для уменьшения пор и морщин.
Натуральные минеральные порошки.

Описание продукта:

Добавьте яркости своему дню с помощью пудры NYC New York Color — Color Wheel Mosaic Face Powder. Эта ультрапрозрачная мягкая прессованная пудра состоит из четырех гармонирующих оттенков. Калейдоскоп оттенков смешиваются для создания идеального единого оттенка, который уравновешивает и усиливает все оттенки кожи.

Советы и хитрости:

Нанесите кистью на пудру и разгладьте лоб, щеки, подбородок и линию подбородка.

Пудра для лица My Take on NYC Color Wheel Mosaic: All Over Bronze Glow:

Как следует из названия, это своего рода бронзер, но его можно использовать в качестве пудры для лица, поскольку пигментация не слишком высока. Я привез этот цвет, так как в моей коллекции не было бронзатора, и я хотел его. Это не идеальный бронзер для коррекции контуров, но мне нравится, как он выглядит на моем лице. Внешний вид продукта дает должное названию; пудра имеет мозаичный узор 3 разных цветов.Самый светлый оттенок — это кремовый цвет, который также можно использовать в качестве хайлайтера, тогда как самый темный оттенок — темно-коричневый. Три цвета можно использовать по отдельности или смешивать вместе, чтобы получить красивое свечение.

Продукт не держится очень долго и не очень пигментирован, но меня устраивает количество, которое я получил за не очень высокую цену.

Плюсы пудры NYC Color Wheel Mosaic Face Powder: All Over Bronze Glow

Хорошее качество.
Придает лицу красивое сияние.
Прочная крышка.
Хорошее количество.

Минусы пудры NYC Color Wheel Mosaic Face Powder: All Over Bronze Glow

Не очень хорошая пигментация.
Немного дорого в Индии.
Выносливость не большая.

Могу ли я выкупить пудру для лица NYC Color Wheel Mosaic: All Over Bronze Glow?

Нет, я больше не куплю этот товар, ни этот цвет, ни какой-либо другой цвет из этой линейки.Мне достаточно двух цветов.

Рекомендую ли я пудру для лица NYC Color Wheel Mosaic: All Over Bronze Glow?

Если вам посчастливится привезти его из США, то его можно попробовать, но, по моему мнению, в Индии это дорого из-за пигментации, поэтому попробуйте другой бронзер.

Рейтинг IMBB:

3/5.

Для меня это средний продукт. Я не жалею о покупке и не хочу покупать снова.

NYC Ultra Last Lip Wear -Plum Rum
NYC New York Color Рассыпная пудра для гладкой кожи
4 NYC City Proof Lip Glosses-Review, Swatches
NYC Liquid Lip Shine Lip Gloss 574 City’s Clear
NYC Smooch Proof Long Wearing Lip Color: Rebel
New York Colours / NYC Blushable Crème Stick Plaza Pink
NYC Color Wheel Мозаичная пудра для лица: Pink Cheek Glow
NYX Mosaic Powder Blush
MUA Mosaic Bronzer — Natural Glow
Collection 2000 Mosaic Shimmering Glow Powder
NYX Mosaic Powder Blush in Paradise
NYX Mosaic Powder Blush in Paradise Смешанная пудра и кисть для лица
Milani Multitasker Powder
The Body Shop Pressed Face Powder
Benefit Dandelion Brighten Powder
The Body Shop Honey Bronze Shimmering Dry Oil
Sleek Makeup Face & Body Highlighter Bronze Baby
L’oreal Glam Bronze Duo Sun Powder Review, Swatch, FOTD
Bobbi Brown Shimmer Brick Bronze Review, Swatch, FOTD
Biotique Biotique Bio Color Moisture Glow Makeup с SPF 50
Набор для новобрачных Nature’s Essence

Использование мышей PB-Cre4 для удаления гена мозаики

Abstract

Экспрессия трансгена с коротких промоторов у трансгенных животных может приводить к нежелательным паттернам экспрессии трансгена, часто как побочный продукт случайной интеграции кассеты экспрессии в геном хозяина.Здесь я демонстрирую, что часто используемая линия PB-Cre4 (также называемая «Probasin-Cre»), хотя и экспрессируется исключительно в эпителии предстательной железы самцов при передаче через самцов мышей, может приводить к рекомбинации аллелей, фланкированных loxP, в большом разнообразии. тканей при передаче через самок мышей. Эта аберрантная активность Cre из-за экспрессии Cre в ооцитах приводит к различным результатам для аллелей loxP, передающихся от матери или от отца: унаследованные от матери аллели с фланкированием loxP очень эффективно подвергаются рекомбинации, что делает самок мышей PB-Cre4 эффективной моноаллельной «Cre делетерной линией». .Однако отцовские наследуемые loxP-фланкированные аллели неэффективно рекомбинируются материнским PB-Cre4, что приводит к мозаичным паттернам экспрессии у потомства. Эту мозаичную рекомбинацию трудно обнаружить с помощью стандартных подходов к генотипированию многих линий мышей, и поэтому следует предостеречь исследователей, использующих PB-Cre4, об использовании дополнительных подходов для исключения присутствия рекомбинированных аллелей. Однако мозаичная рекомбинация также может быть полезна в подходах с «нокаутом» трансгенных клеток для экспериментов по мозаичной делеции генов.

Образец цитирования: Birbach A (2013) Использование мышей PB-Cre4 для удаления гена мозаики. PLoS ONE 8 (1): e53501. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0053501

Редактор: Вэй Янь, Медицинский факультет Университета Невады, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 10.10.2012; Одобрена: 29 ноября 2012 г .; Опубликовано: 7 января 2013 г.

Авторские права: © 2013 Андреас Бирбах.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа финансировалась за счет гранта Австрийского научного фонда FWF (проект № P21919-B13). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Автор заявил об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Экспрессия трансгена у трансгенных животных часто достигается с помощью короткого промоторного элемента, который в идеале должен ограничивать экспрессию гена в конкретной интересующей ткани. Однако использование этих небольших единиц экспрессии и классической трансгенной техники пронуклеарной инъекции приводит к случайной интеграции единицы в геном. Следовательно, экспрессия трансгена находится под контролем не только короткого промоторного элемента, но и локуса хозяина. Это приводит к аберрантным паттернам экспрессии трансгена во многих трансгенных линиях с экспрессией в тканях, в первую очередь не нацеленных [1].Использование более крупных конструкций, таких как бактериальные искусственные хромосомы, может помочь контролировать эти эффекты [2]. Для коротких трансгенных конструкций и случайной интеграции часто бывает трудно различить вклад самого промотора, локуса или комбинаторного эффекта промотора в его непосредственном окружении в конкретный паттерн экспрессии трансгена в одной линии. Использование нескольких трансгенных линий и / или клонирование и анализ сайта интеграции могут помочь в объяснении паттерна.

Линия PB-Cre4 была создана для достижения тканеспецифичных делеций гена в эпителии простаты [3]. В этой линии используется хорошо описанный промотор ARR2PB, содержащий проксимальный элемент промотора крысиного Probasin (PB) и две андроген-чувствительные области (ARR), чтобы направлять экспрессию трансгена рекомбиназы Cre в эпителиальных клетках простаты [4]. PB-Cre4 использовался во многих исследованиях для достижения рекомбинации / делеции генов в эпителии простаты [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12] , [13].Линия была тщательно охарактеризована и демонстрирует активность Cre-рекомбиназы в эпителии предстательной железы всех долей простаты мыши и редкую рассеянную рекомбинацию в фиброзно-мышечной строме. Кроме того, ограниченная активность точечного рисунка наблюдалась в клетках семенников и яичников. В этой статье я демонстрирую, что активность фолликулов ооцитов может быть использована либо для полной абляции loxP-фланкированного («флоксованного») аллеля, то есть использования PB-Cre4 в качестве делетерной линии, либо для удаления флоксованных элементов в мозаике. паттерн, зависящий от материнского или отцовского наследования флоксованного аллеля.

Материалы и методы

Заявление об этике

Содержание животных и их принесение в жертву соответствовали директивам Венского медицинского университета и Министерства науки Австрии. Исследование было одобрено этическим комитетом Венского медицинского университета.

Животные

мышей PB-Cre4 [3] (официальная номенклатура штаммов: Tg (Pbsn-cre) 4Prb) были получены из репозитория мышей NCI Frederick и были скрещены более 10 поколений в C57BL / 6JHim (полученный из когорта Венского медицинского университета в Химберге, Австрия).

Мыши с loxP-фланкированными аллелями опухолевого супрессора Pten были подарком профессора Так Мак [14]. Мыши с кассетой-репортером (мыши CAG-loxP-CAT-loxP-EGFP) были подарком профессора Джун-ичи Миядзаки [15]. Все животные содержались на фоне C57BL / 6JHim.

ПЦР для генотипирования

Генотипирование проводилось на ДНК, выделенной из биоптатов хвоста. Биопсии хвоста (длиной около 2 мм) переваривали в 500 мкл лизирующего буфера (400 мМ NaCl, 0,1% SDS, 2 мМ EDTA, 0,12 мг / мл протеиназы K) в течение 3–24 часов при 58 ° C.Добавляли 200 мкл 5 М NaCl, остатки хвоста осаждали (5 ‘14000 г) с последующим осаждением ДНК из супернатанта добавлением 1 объема изопропанола. Осадок ДНК осаждали (30 ‘14000 г), промывали 70% этанолом, сушили и растворяли в 100 мкл 10 мМ Tris pH8. Для ПЦР использовали 1 мкл этого раствора.

Праймеры для генотипирования Pten были (согласно схеме на рисунке 1): праймер 1: 5′-GGT AGA CTA GTC GGT ACT CAG-3 ‘, праймер 2: 5′-CTCCTCTACTCCATTCTTCCC-3’, праймер 3: 5 ′ -ACTCCCACCAATGAACAAAC-3 ′.ПЦР проводили в течение 35 циклов с температурой отжига 55 ° C и временем элонгации 60 дюймов при 72 ° C.

Рис. 1. Материнский PB-Cre4 приводит к эффективной рекомбинации материнских аллелей, фланкированных loxP.

A, схема разведения: самцы мышей дикого типа с двумя аллелями Pten дикого типа (помечены «+») были скрещены с самками мышей, несущих трансген ARR2PB-Cre (линия PB-Cre4) и фланкированный loxP аллель Pten ( «Flox»), а также аллель дикого типа. Ожидаемый результат (изображенный здесь) в отношении статуса потомства Pten будет равным количеству Pten + / + (по одному аллелю дикого типа от отца и матери животного) и Pten flox / + (один дикий тип аллель от отца, один флоксированный аллель от матери) животных.B, Схема аллеля Pten и праймеров (красные стрелки), используемых для их обнаружения. ПЦР с использованием праймеров 2 и 3 дает полосу для аллеля + и большую полосу для аллеля floxed. В случае рекомбинации последовательность между двумя сайтами loxP (синие треугольники) удаляется, что дает дельта-аллель, который может быть обнаружен с помощью ПЦР праймеров 1 и 3. C, примеры ПЦР с различением праймеров 2/3 (слева) между генотипами + / + и flox / + и ПЦР с праймерами 1/3, обнаруживающими дельта-аллели (справа).На левом изображении использовались биопсии хвоста мышей-потомков, где одно родительское животное несло аллель Pten flox и ни одно не несло трансген PB-Cre4, в то время как для правого изображения использовались биопсии хвоста от потомства мышей разведения, указанного в A. использовал. D, У потомков, выращенных в A, комбинация flox / + не была обнаружена, но дельта / + наблюдалась почти в равных количествах, как + / +.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0053501.g001

Криосекция и микроскопия

Мышей умерщвляли в возрасте 4-8 недель, ткани удаляли и фиксировали в 4% параформальдегиде в 1-кратном фосфатно-солевом буфере (PBS) при pH = 7-7.4. После фиксации в течение 1-2 часов ткани переносили в смесь 20% сахарозы / 1xPBS и инкубировали в течение ночи при 4 ° C. Затем ткани переносили в TissueTek (Sakura Finetek) и подвергали шоковой заморозке в жидком N2, затем хранили при -80 ° C до разрезания. Срезы размером восемь микрометров были вырезаны с использованием криостата Microm HM500 OM и закреплены на предметных стеклах SuperFrost Plus (Thermo Scientific). Предметные стекла сушили в течение 2 часов при комнатной температуре, несколько раз промывали PBS, и в последнюю промывку добавляли Hoechst 33342 (бисбензимид; Sigma) при 100 нг / мл для контраста ядер.Образцы заливали PBS / глицерином (1–7), закрывали покровными стеклами и покрывали лаком для ногтей. Изображения получали на микроскопе Olympus AX470, оборудованном цифровой камерой F-View II (шкала серого), с использованием программного обеспечения производителя (CellP) и соответствующих наборов фильтров для флуоресценции.

Геном ходьбы

Для клонирования вышестоящих последовательностей трансгенной кассеты 2,5 мкг геномной ДНК расщепляли одним из ряда рестрикционных ферментов с тупым концом (AluI, DraI, SmaI, EcoRV, PvuII) в общем объеме 100 мкл.ДНК очищали экстракцией фенолом / хлороформом с последующим осаждением этанолом. Адаптерами были следующие: 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGCACGCGTGGTCGACGGCCCGGGCTGGT -3 ‘и 5′- (PO4) ACCAGCCC (Nh3) -3′, при этом PO4 означает фосфорилирование на 5′-конце и аминирование Nh3 на 3’-конце. Адаптеры отжигали, нагревая 1-1 смесь олигонуклеотидов адаптеров до 100 ° C и давая медленно остыть до комнатной температуры. Адаптеры лигировали к расщепленной геномной ДНК с использованием концентрированной ДНК-лигазы Т4 (New England Biolabs).

Первая ПЦР была проведена с праймерами 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3 ‘(в адапторной последовательности) и 5′-CTAGGCATGGACAATGCCCAATGC-3’ (в ARR2PB) в следующих условиях цикла: 94 ° C 2 ‘, 7 циклов: 94 ° C 25 ″ –72 ° C 3 ′, 32 цикла: 94 ° C 25 ″ –67 ° 3 ′, 67 ° C 7 ′. 1 мкл разведенной (1-50) ПЦР использовали в качестве матрицы для вложенной ПЦР с использованием праймеров 5’-ACTATAGGGCACGCGTG-3 ‘(в адаптере) и 5′-CCCAATGCCTGTCCCATTCTTCAGGCAT-3’ (в ARR2PB) и следующего цикла условия: 94 ° C 2 ′, 5 циклов 94 ° C 25 ″ –72 ° C 3 ′, 30 циклов 94 ° C 25 ″ –67 ° C 3 ′, 67 ° C 7 ′.

Сайт интеграции

подтвержден праймерами 5′-GAT GAA GCC CAG GTG CCA GTT G-3 ‘(хромосома 11) и 5′-CCC AAT GCC TGT CCC ATT CTT CAG GCA T-3’ (ARR2PB). Температура отжига для этой ПЦР составляла 64 ° C, ПЦР проводили в течение 35 циклов с временем элонгации (при 72 ° C) 90 ″.

Результаты

Материнский PB-Cre4 приводит к полному удалению материнских Loxp-фланкированных аллелей

Моя группа использовала мышей PB-Cre4 для создания модели развития воспалительной опухоли в простате [16].При разведении животных для этой модели мы наблюдали неожиданные фенотипы у подгруппы мышей, включая развитие опухолей в других органах, кроме простаты. Я подозревал, что причиной этих фенотипов является аномальная активность Cre. Было показано, что PB-Cre4 активен в небольшом количестве клеток в яичках (семенные канальцы), а также в яичниках (ооциты) [3]. Чтобы проверить эту гипотезу, я организовал ряд тестовых скрещиваний с использованием линии PB-Cre4 вместе с линией, несущей loxP-фланкированный аллель опухолевого супрессора Pten , который использовался в наших исследованиях.Для анализа генотипа использовалась ПЦР, позволяющая отличить нормальный аллель, т.е. аллель «дикого типа» от loxP-фланкированного («флоксованного») аллеля, а также ПЦР, выявляющая вырезанный («дельта») аллель Pten (рис. 1). При разведении мышей-самцов, несущих PB-Cre4 в дополнение к аллелю Pten flox и аллелю Pten дикого типа, с самками дикого типа, наблюдали нормальное распределение аллеля Pten flox и Pten дикого типа в потомстве. Дельта-аллель не обнаружен (не показан).Однако при скрещивании мышей-самцов дикого типа с самками мышей, несущих трансген PB-Cre4, а также аллели Pten flox и дикого типа, floxed аллель никогда не передавался. Вместо этого часть потомства несла дельта-аллель в биоптатах хвоста (рис. 1). Это указывает на то, что активность Cre в ооцитах достаточна для индукции рекомбинации. Таким образом, самки мышей PB-Cre4 можно использовать для эффективной делеции наследуемых по материнской линии loxP-фланкированных элементов ДНК. В наших руках эффективность, вероятно, близка к 100% (floxed аллель никогда не был обнаружен), тогда как более ранняя характеристика PB-Cre4 упоминала передачу floxed аллеля примерно в половине случаев.

Материнский PB-Cre4 опосредует удаление мозаикой отцовских LoxP-фланкированных аллелей

Экспрессия PB-Cre4 в ооците приводит к эффективной делеции аллеля, фланкированного loxP, присутствующего в геноме ооцита. При разведении самок мышей PB-Cre4 с активностью Cre ооцита с самцами мышей, несущих loxP-фланкированный аллель, ситуация менее предсказуема, и есть три возможных исхода: во-первых, уровни Cre в оплодотворенных ооцитах недостаточны для опосредования рекомбинации, и loxP -фланговый аллель передается как таковой, дельта-аллель не обнаруживается.Во-вторых, уровень Cre / активность в оплодотворенном ооците достаточен для опосредования рекомбинации, и loxP-фланкированные аллели всегда трансформируются в дельта-аллели. В-третьих, Cre присутствует в оплодотворенном ооците, но уровни находятся в диапазоне, который не всегда приводит к рекомбинации флоксованного аллеля. Вместо этого стохастический процесс Cre-опосредованной делеции имеет место в одной (ых) клетке (ах) многоклеточного раннего эмбриона. В последнем случае это привело бы к мозаичному животному, состоящему из клеток как с нерекомбинированными (объединенными), так и с рекомбинированными (удаленными) аллелями.

Чтобы различить эти возможности, мышей-самцов, несущих аллель Pten flox и Pten дикого типа, скрещивали с самками мышей, несущих PB-Cre4. Я получил мышей с аллелем дикого типа, мышей, несущих аллель floxed или дельта-аллель, и мышей, несущих как floxed, так и дельта-аллель, согласно ПЦР из биопсии хвоста (рис. 2). Это указывает на то, что действительна третья возможность, и активность Cre ограничена созданием мозаичных животных.

Рисунок 2.Материнский PB-Cre4 приводит к мозаичной делеции отцовских переданных loxP-фланкированных аллелей.

А, схема разведения. Самцов мышей, несущих Pten flox и Pten + аллель, скрещивали с самками мышей, несущих трансген Cre. В отсутствие аномальной активности Cre ожидается равное распределение потомков Pten + / + и Pten flox / +. B, результаты разведения: материнский PB-Cre4 и отцовский Pten flox / + приводят к потомству, в котором аллель floxed все еще присутствует примерно с ожидаемой частотой в биопсии хвоста, но также может быть обнаружен дельта-аллель, что указывает на удаление мозаики.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0053501.g002

Мозаицизм можно визуализировать в различных тканях

Чтобы продемонстрировать мозаицизм в ряде тканей и разрешить его на клеточном уровне, а не только в образце ДНК из нескольких клеток, подход к селекции был изменен. Самок мышей PB-Cre4 скрещивали с мышами-самцами, несущими аллель с стоп-кассетой, фланкированной loxP, за которой следовала кДНК, кодирующая EGFP. Эта единица экспрессии находится за повсеместным промотором, что означает, что EGFP экспрессируется в различных тканях после Cre-опосредованной делеции стоп-кассеты.Потомство от этих разводок забивали в молодом возрасте и готовили криосрезы, как описано в методах. Мозаицизм был замечен во всех исследованных органах (Рисунок 3, Рисунок 4; Рисунок S1, Рисунок S2). Однако обнаружение было затруднено в некоторых типах клеток из-за более низких уровней экспрессии трансгена EGFP. Экспрессия репортерного гена наблюдалась в клетках разного происхождения, таких как эпителиальные клетки почек или кожи, а также клетки гладких или сердечных мышц. Если бы мозаицизм возник в результате рекомбинации одной клетки на многоклеточной стадии, можно было бы ожидать, что дочерние клетки, возникающие из рекомбинированных клеток, образуют группы во взрослой ткани.Этот образец был замечен в таких органах, как печень, почка или легкое, в то время как образцы экспрессии в головном мозге оказались более разбросанными. Это может указывать на миграцию клеток во время развития мозга.

Рисунок 3. Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских аллелей, которые могут быть визуализированы у репортерных животных (часть I).

A, самок мышей, несущих трансген Cre, скрещивали с мышами-самцами, несущими один аллель CAG-loxP-CAT-loxP-EGFP, конструкции, экспрессирующей ген CAT от конститутивного промотора (CAG).Ген CAT фланкирован loxP (треугольники), и после Cre-опосредованной рекомбинации этот аллель будет экспрессировать EGFP. B, разные органы (здесь: печень, почки, кора головного мозга) демонстрируют мозаичную флуоресценцию EGFP у потомства животного из этого разведения. Срезы ткани животного, не экспрессирующего EGFP («нефлуоресцентный»), показаны в качестве контрольных для выделения аутофлуоресценции ткани. Показано, что окрашивание по Hoechst демонстрирует архитектуру ткани. Масштабные линейки, 100 мкм.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0053501.g003

Рис. 4. Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских аллелей, которые могут быть визуализированы у репортерных животных (часть II).

Органы того же животного, что и на Рисунке 3, демонстрируют мозаицизм в различных тканях. Контроли использовали, как показано на рисунке 3. Масштабные линейки, 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0053501.g004

Печень была органом с наилучшим соотношением сигнал / шум.Поэтому я решил количественно оценить степень мозаицизма с помощью срезов этого органа от разных мышей. Чуть более половины животных-потомков не проявляли флуоресценции EGFP. Это ожидаемо, поскольку самцы в разведениях несли только один аллель трансгена CAG-loxP-CAT-loxP-EGFP. Флуоресцентные ткани печени (n = 15) показали разную степень мозаицизма. Фракция показала флуоресценцию EGFP только в нескольких клетках на срезе ткани, в то время как я также обнаружил печень с очевидной полной рекомбинацией.Большинство тканей показало промежуточную степень мозаицизма (Рисунок 5, Рисунок S3).

Рис. 5. Различные степени мозаицизма в трансгенной печени.

Цифры над изображениями указывают процент EGFP-положительных клеток (верхний ряд) и количество животных (из n = 15 животных с любой степенью мозаичности, то есть флуоресценции EGFP) в соответствующей группе (строка ниже). Примеры тканей соответствующих групп показаны под номерами. Масштабные линейки, 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0053501.g005

Кассета трансгена ARR2PB-Cre интегрирована близко к теломерному концу хромосомы 11q

Чтобы определить причины аберрантной активности Cre, т.е. оценить, связана ли экспрессия Cre в ооците с сайтом интеграции трансгена или с промотором, я попытался определить локус интеграции PB-Cre4.

Последовательность интегрированной конструкции ARR2PB-Cre была клонирована с использованием модифицированной процедуры «прогулки по геному» [17].Метод кратко поясняется на рисунке 6 (подробности см. В разделе «Материалы и методы»). Он основан на переваривании геномной ДНК различными рестрикционными ферментами, создающих тупые концы и лигировании адаптеров на фрагменты разного размера, с последующей ПЦР и вложенной ПЦР с использованием праймеров внутри адаптеров и исходной последовательности (в данном случае последовательности ARR2PB). Полученные ПЦР-фрагменты секвенировали. Я идентифицировал геномную последовательность на хромосоме 11 мыши (GRCm38: 11: 120521381 (ENSEMBL release 69) согласно номенклатуре ENSEMBL) рядом с трансгенной последовательностью ARR2PB.Этот локус на длинном плече хромосомы 11 (11q) находится близко к теломерному концу. Чтобы проверить этот предполагаемый сайт интеграции, были проведены ПЦР с праймерами, не связанными с процедурой клонирования, чтобы подтвердить связь между локусом хромосомы 11 и последовательностью ARR2PB-Cre (рис. 6). Очень маловероятно, что второй, независимый сайт интеграции присутствует в этой линии, потому что мышей разводили в нашей лаборатории более 10 поколений, и сайт интеграции согласно ПЦР присутствует у всех протестированных животных, включая самку PB- Мыши Cre4, у которых обнаружен феномен полной или частичной рекомбинации у потомства.

Рисунок 6. Клонирование сайта интеграции PB-Cre4.

A — схема используемой процедуры прогулки по геному. Геномную ДНК разрезали с использованием резаков для тупых концов с последующим лигированием адаптерных олигонуклеотидов. Вложенную ПЦР проводили с использованием праймеров в адаптерах, а также специфичных для генов праймеров. Ген-специфические праймеры в последовательности ARR2PB примированы дважды из-за двух идентичных андроген-чувствительных областей. Соответствующие результаты для различных фрез с тупым концом показаны на B.Полосы, полученные для SmaI и PvuII, секвенировали. Последовательность для полосы SmaI (стрелка) показана в C. D, праймеры для ПЦР были сконструированы в пределах предполагаемой фланкирующей (восходящей) последовательности и в пределах ARR2PB (снова дважды праймировав), давая двойную полосу, как ожидалось. Полосы снова секвенировали, подтверждая сайт интеграции.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0053501.g006

Идентифицированный локус не был описан как экспрессирующийся в ооците или раннем эмбрионе.Я проверил экспрессию генов, ближайших к сайту интеграции, Slc25a10 (митохондриальный носитель) и Gcgr (рецептор глюкагона) in silico. База данных NCBI UniGene EST (метка экспрессируемой последовательности) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/unigene) не обнаружила каких-либо EST для этих генов в оплодотворенной яйцеклетке или яичнике. В базе данных BioGPS (http://www.biogps.org) также не было обнаружено экспрессии в яичнике. Таким образом, аберрантная активность Cre в ооците может быть не связана с локусом интеграции.

Обсуждение

Этот отчет имеет значение на разных уровнях. Во-первых, он демонстрирует полезность, а также ограничения использования PB-Cre4 для делеций генов, специфичных для простаты, и призывает не использовать самок мышей, несущих трансген, для разведения. В частности, в этом отношении важно обнаружение мозаицизма отцовских наследуемых флоксированных аллелей. В следующем примере подчеркивается причина этого предупреждения: Большинство трансгенных разводов контролируется методом ПЦР, различающим аллель «дикого типа» и «флоксованный».Хотя полная делеция, как и в случае наследуемых от матери аллелей, фланкированных loxP, будет обнаружена через некоторое время из-за отсутствия полос ПЦР для этих аллелей, мозаичная делеция не обнаружится. В случае мозаицизма аллели дикого типа и флоксированные будут присутствовать в потомстве в примерно правильных соотношениях, в то время как удаленный («дельта») аллель обычно не проверяется при генотипировании. Таким образом, потомству приписывается генотип дикого типа или флоксированный генотип определенного аллеля, в то время как, кроме того, он несет мозаичную делецию, которая может вызывать фенотип.Теоретически это может привести к отнесению определенного фенотипа простаты к делеции эпителиального гена, в то время как фенотип возникает только из-за (дополнительной) мозаичной делеции в фиброзно-мышечной строме или инфильтрации иммунных клеток. Поэтому рекомендуется, чтобы исследователи, использовавшие PB-Cre4 в своей работе и не обратившие внимания на передачу гена Cre только от самцов животных при разведении, пересмотрели свои выводы в этом отношении. Однако следует отметить, что PB-Cre4, когда он передается только мужчинами, является безопасным и точным способом достижения делеции гена, специфичного для простаты, как в моих руках, так и в многочисленных литературных отчетах.В случае, если требуется передача от партнеров по размножению как самцов, так и самок, например при проведении сложных множественных трансгенных животных рекомендуется использовать одну из индуцибельных простат-специфичных линий Cre [18], [19]. Было показано, что эти линии специфичны для эпителия и поэтому обладают дополнительным преимуществом по сравнению с PB-Cre4. Еще одним ценным в этом отношении штаммом является линия PSA-Cre [20].

Во-вторых, открытие, что материнский PB-Cre4 приводит к мозаичной делеции отцовских флоксовых аллелей, в то же время полностью удаляя материнские флоксовые аллели, полезно для трансгенных исследований.Изучение мозаичных паттернов делеций с использованием репортерных генов, начатое в этом исследовании, может быть интересно для биологии развития при изучении вклада клеток ранних эмбрионов во взрослые ткани, а также при изучении миграции клеток во время развития. Мозаичная делеция также может быть полезна для экспериментов с классической делецией («нокаутом») генов. Например, если исследователь хочет изучить интересующий ген ( Gene A ) в нескольких тканях взрослого человека, а полная делеция гена ( Gene A — / -) является смертельной для эмбриона, исследователь может захотеть рассмотреть мозаичное удаление floxed аллель поверх гетерозиготного ( Gene A +/-) фона.Это могло бы избежать эмбриональной летальности и позволить изучать функцию генов в нескольких тканях без необходимости в нескольких тканеспецифичных линиях Cre.

В-третьих, идентификация сайта интеграции PB-Cre4 имеет значение для пользователей этой линейки. Хотя сайт интеграции не находится в локусе, известном для экспрессии в ооците или раннем эмбрионе, нельзя исключать, что интеграция промотора в микроокружение создает сайты связывания для активаторов транскрипции, активных в ооците.Более того, все еще возможно, что сам промотор ARR2PB приводит к экспрессии в фолликулах яичников, хотя трансгенные мыши ARR2PB-CAT не проявляют активности репортерного гена в яичнике [4]. В той же статье показано, что промотор ARR2PB активируется не только рецептором андрогена, но и другими ядерными рецепторами, такими как рецептор глюкокортикоидов. Возможно, что активность ядерного рецептора в ооците приводит к экспрессии промотора. Ограниченные уровни экспрессии в небольшом количестве клеток, таких как ооциты в яичнике, может быть трудно обнаружить, но все же достаточны для индукции Cre-опосредованной рекомбинации.Сайт интеграции на хромосоме 11 (GRCm38: 11: 120,521,381) также имеет значение для биаллельной делеции гена с помощью PB-Cre4: из-за генетической связи гены с локусами, близкими к сайту интеграции, будут демонстрировать пониженную эффективность размножения (т. Е. Вероятность подходящего события кроссинговера) у сложных мышей с loxP-фланкированными аллелями для этих генов и PB-Cre4. Например, этот сайт находится примерно в 20 мегабазах от локусов Stat3 и Stat5 , двух хорошо известных сигнальных генов рака.Локус для Socs3 , также вовлеченного в рак простаты, находится всего в 2 мегабазах от сайта интеграции. Учитывая, что 1 сантиморган примерно соответствует 1 мегабазе в геноме мыши, эффективность для хромосомы, несущей в потомстве как PB-Cre4, так и Socs3 flox, будет всего 2%.

В заключение, выводы представленных результатов можно резюмировать в трех коротких утверждениях:

PB-Cre4 будет точно поддерживать делецию гена, специфичного для простаты, только при передаче через самцов животных; передача через самки животных вызывает полную или мозаичную делецию, которую можно легко упустить из виду при использовании обычных стратегий генотипирования.
Мозаичная делеция гена отцовских переданных loxP-фланкированных аллелей материнским PB-Cre4 может быть полезным инструментом для экспериментов по делеции генов и биологии развития.
Сайт интеграции трансгена следует учитывать при нацеливании на аллели, близкие к сайту интеграции.

Благодарности

Я хочу поблагодарить Дэвида Эйзенбарта, Еву Ладенхаф и Вальтера Хубера за помощь с генотипированием. Спасибо анонимным рецензентам за их критическую оценку рукописи.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AB. Проведены эксперименты: AB. Проанализированы данные: AB. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: AB. Написал бумагу: AB.

Список литературы

1. Houdebine LM (2002) Способы получения трансгенных животных и контроля экспрессии трансгена. J Biotechnol 98: 145–160.
2. Giraldo P, Montoliu L (2001) Размер имеет значение: использование YAC, BAC и PAC у трансгенных животных.Transgenic Res 10: 83–103.
3. Wu X, Wu J, Huang J, Powell WC, Zhang J и др. (2001) Создание модели трансгенной мыши Cre, специфичной к эпителиальным клеткам предстательной железы, для абляции тканеспецифического гена. Mech Dev 101: 61–69.
4. Zhang J, Thomas TZ, Kasper S, Matusik RJ (2000) Небольшой составной промотор пробазина обеспечивает высокие уровни экспрессии генов, специфичных для простаты, посредством регуляции андрогенами и глюкокортикоидами in vitro и in vivo. Эндокринология 141: 4698–4710.
5. Тротман Л.С., Ники М., Дотан З.А., Кутчер Дж. А., Ди Кристофано А. и др. (2003) Доза Птен определяет прогрессирование рака простаты. PLoS Biol 1: E59.
6. Ван С., Гао Дж., Лей К., Розенгурт Н., Притчард С. и др. (2003) Простат-специфическая делеция гена супрессора опухоли Pten мыши приводит к метастатическому раку простаты. Cancer Cell 4: 209–221.
7. Kelavkar UP, Parwani AV, Shappell SB, Martin WD (2006) Условная экспрессия человеческой 15-липоксигеназы-1 в простате мыши индуцирует интраэпителиальную неоплазию простаты: модель мыши FLiMP.Неоплазия 8: 510–522.
8. Zhou Z, Flesken-Nikitin A, Corney DC, Wang W, Goodrich DW и др. (2006) Синергия дефицита p53 и Rb в условной мышиной модели метастатического рака простаты. Cancer Res 66: 7889–7898.
9. Мэддисон Л.А., Сазерленд Б.В., Барриос Р.Дж., Гринберг Н.М. (2004) Условная делеция Rb вызывает рак простаты на ранней стадии. Cancer Res 64: 6018–6025.
10. Francis JC, McCarthy A, Thomsen MK, Ashworth A, Swain A (2010) Дефицит Brca2 и Trp53 взаимодействует в прогрессировании опухолевого процесса простаты у мышей.PLoS Genet 6: e1000995.
11. Pearson HB, Phesse TJ, Clarke AR (2009) Передача сигналов K-ras и Wnt синергетически ускоряет онкогенез простаты у мышей. Cancer Res 69: 94–101.
12. Bruxvoort KJ, Charbonneau HM, Giambernardi TA, Goolsby JC, Qian CN и др. (2007) Инактивация Apc в простате мышей вызывает карциному простаты. Cancer Res 67: 2490–2496.
13. Wu X, Xu K, Zhang L, Deng Y, Lee P и др. (2011) Дифференциация протокового эпителия и гладких мышц в предстательной железе регулируется Notch / PTEN-зависимым механизмом.Дев Биол 356: 337–349.
14. Сузуки А, Ямагути МТ, Охтеки Т, Сасаки Т, Кайсё Т и др. (2001) Т-клеточная потеря Pten приводит к дефектам центральной и периферической толерантности. Иммунитет 14: 523–534.
15. Кавамото С., Нива Х., Таширо Ф., Сано С., Кондо Дж. И др. (2000) Новый репортерный штамм мышей, который экспрессирует усиленный зеленый флуоресцентный белок после Cre-опосредованной рекомбинации. FEBS Lett 470: 263–268.
16. Бирбах А., Эйзенбарт Д., Козаковски Н., Ладенхауф Е., Шмидт-Супприан М. и др.(2011) Устойчивое воспаление приводит к пролиферативной неоплазии и потере гладкомышечных клеток в модели опухоли простаты. Неоплазия 13: 692–703.
17. Зиберт П.Д., Ченчик А., Келлог Д.Е., Лукьянов К.А., Лукьянов С.А. (1995) Усовершенствованный метод ПЦР для ходьбы в неклонированной геномной ДНК. Nucleic Acids Res 23: 1087-1088.
18. Birbach A, Casanova E, Schmid JA (2009) Probasin-MerCreMer BAC позволяет индуцибельную рекомбинацию в простате мыши. Бытие 47: 757–764.
19. Ratnacaram CK, Teletin M, Jiang M, Meng X, Chambon P и др. (2008) Временно контролируемое удаление PTEN в эпителии простаты взрослых мышей создает модель инвазивной аденокарциномы простаты. Proc Natl Acad Sci U S A 105: 2521–2526.
20. Ma X, Ziel-van der Made AC, Autar B, van der Korput HA, Vermeij M и др. (2005) Нацеленная двуаллельная инактивация Pten в предстательной железе мыши приводит к раку простаты, сопровождающемуся повышенной пролиферацией эпителиальных клеток, но не снижением апоптоза.Cancer Res 65: 5730–5739.

60 лучших обручальных колец до 5000 долларов от 2021 года

Rebecca Overmann Кольцо с тотемом воздушного змея с огранкой Rose

Предоставлено

Кольцо с бриллиантом разной формы — собственное маленькое произведение искусства. Белые бриллианты огранки «роза» в желтом золоте 14 карат, несомненно, привлекают внимание.

На что обращать внимание при выборе обручального кольца до 5000 долларов

Группа

На бюджет? Нет ничего важнее! Начните с определения наиболее важных для вас характеристик обручального кольца.Для большинства невест это означает сосредоточение бюджета на размере центрального камня в каратах. «Чем проще ремешок, тем меньше вы потратите на дополнительные украшения и тем больше денег уйдет на бриллиант. Пропуск микропаве или дополнительных боковых камней поможет снизить затраты», — говорит Николь Вегман.

Если вы против простой группы, есть множество творческих альтернатив, чтобы добиться этого потрясающего вида. Текстурированные, расшитые бисером, соединенные или разделенные стержни конструкции — это лишь некоторые из способов создать замысловатость и мерцание.

Камень

К счастью, мир обручальных колец — это гораздо больше, чем просто бриллианты! Множество очаровательных цветных камней, а также камней, которые напоминают бриллианты, позволят вам получить меньше.

Все еще жаждете этого бриллианта? Это тоже нормально! Есть творческие способы осуществить эту мечту, при этом сокращая расходы. «Избегайте популярных форм, таких как овалы или более дорогая огранка, круглые бриллианты, чтобы снизить затраты. Вам также следует придерживаться бесцветного диапазона и покупать алмаз цвета G, что почти на восемь процентов меньше, чем цвет F, но почти незаметная визуальная разница. .Мы также советуем покупать только те товары, которые продаются в каратах, потому что цены на каждую марку в каратах резко возрастают «, — предлагает Вегман.

Стиль

«Выбрав более простую оправу, вы сможете максимально увеличить размер своего бриллианта, не выходя за рамки своего бюджета. Если вы твердо настроены на дополнительные детали бриллианта или кольцо с тремя камнями, вы, безусловно, сможете найти это менее чем за 5000 долларов «, — заявляет Вегман.

Независимо от вашего стиля, кольцо может быть создано, чтобы передать суть кольца вашей мечты, но при этом сохранить ваш банковский счет счастливым.У некоторых ювелиров есть инструменты для поиска обручального кольца в рамках вашего бюджета. Бюджетный приятель Shane Co. позволяет вам ввести свой бюджет, прежде чем дать вам множество возможностей, над которыми можно зацикливаться.

Часто задаваемые вопросы

Какой самый доступный стиль обручального кольца? «Простой пасьянс будет самым доступным вариантом», — заявляет Вегман. «Вы всегда можете найти доступное обручальное кольцо в любом стиле! К счастью, не только одно», — уверяет Аманда Тревизо.
Какой драгоценный камень самый доступный? «Полудрагоценные камни, такие как морганит, очень недороги и представляют собой прекрасную альтернативу бриллиантам», — предполагает Вегман. «Сапфиры и другие драгоценные камни могут быть более доступными, чем алмазы, но, как и любой центральный камень, вы платите за то, насколько он редок, поэтому размер, форма и цвет могут играть роль в ценообразовании. Сделайте свою домашнюю работу, а затем работайте со своим ювелиром. , так что вы можете увидеть разнообразие внешнего вида и цен », — говорит Тревизо.
Могу ли я позже добавить в свое обручальное кольцо больше бриллиантов или камней? «Это отличный вопрос для того места, где вы покупаете.В конечном итоге это может зависеть от того, где вы хотите разместить дополнительные камни, а также от дизайна и структуры кольца. Если в магазине, где вы покупаете, есть собственный ювелир, вы всегда можете включить его в разговор », — рекомендует Тревизо.

мой Сид (Роджер) Барретт проект

2012-09-01

Ева Вейкниет: мой проект Сида (Роджера) Барретта

Ева Вейкниет.

В 2011 году Ева Вейкниет из Нидерландов не только успела побывать выставка Барретта в (недавно закрытой) Галерее генерации идей, но она также получила ногой в дверь Либби Гаусден Чисман, пару месяцев спустя.Когда Святая Церковь Игги-инуитов распространила слух, что она писала свою историю для публикации в Dutch Pink Флойд Фанс, Нидерланды, фан-страница, мы переместили небо и землю, чтобы опубликовать ее репортаж также на церковных страницах.

Это стоило нам крови, пота, струйной печати и синего лака для ногтей, но вот оно это чудесная история Евы, друзей и семьи в веселом Барретте. земля. Большое, большое спасибо Либби Гаусден за ее поддержку и Еве за эта история.

Сид Барретт в кожаной куртке.

Ева Вейкниет: мой Сид (Роджер) Барретт, проект

У вас в эти годы много чего происходит, больше, чем в другие годы.
2011 г. был такой для меня.

На самом деле это началось в 2010 году, когда я познакомился с создателями « Barrett» книга «. Имейте в виду, не то, что я лично встречался с ними, а через социальные сети, как сегодня.

Однажды я видел (уже давно) серию документального сериала «The семь веков рока »с особым акцентом на происхождение психоделический рок, и в особенности расплывчатый и относительно неизвестный первый фронтмен Pink Floyd. Я знал Pink Floyd, но не очень интересуются их известными работами. Но когда я увидел этот документальный фильм, я был приклеен к трубке, как пчела на горшочке с медом. Кем была эта внешность? Что это был за шум? Что это за особенная история и почему я не знал Это?

Я должен был докопаться до сути… мой исследовательский проект «Сид (Роджер)» Барретт «начал …

Сначала я прочитал несколько книг. « Очень неправильная голова » Роба Чепмен и « Dark Globe » Джулиана Паласиоса были первыми, и после множества других (все на английском) они стали лучшими в мое мнение. Что было такого в этом человеке? Почему это великолепное и блестящий облик человека исчез со сцены на глазах у всего мира лежать у ног этой мега-группы?

Он был художником…
Он был гитаристом …
Он был сумасшедшим …
Он был кислотной жертвой …
Он стал отшельником …
Сотни, тысячи смутные рассказы о происшествиях …
Как это было на самом деле?

Я, так сказать, сильно увлекся своим предметом или исследованием.
месяцев блуждания по Интернету и многих расширений моей сети Facebook последовал, и через некоторое время я наткнулся на сайт Essential Works где авторы Рассел Бичер и Уилл Шутс были заняты составлением книги о Сиде.

Это должен был быть полный визуальный обзор Барретта как «художника». А книга с невиданными ранее фотографиями и сборник его работ что еще можно было отследить или что было сфотографировано. Эта книга также есть (любовные) письма очень молодого Сида, полные ожиданий жизнь, ища цель, ища подтверждения своих близких, неуверенный в своих музыкальных способностях в студенческом оркестре со своими товарищами Роджером, Ник, Рик и Боб.

Чтобы опубликовать эту книгу, авторы обратились за поддержкой.

В течение нескольких месяцев я лихорадочно теребил и фейсбуков, и в ноябре В 2010 году прозвучало высокое слово … книгу собирались издать! К спасибо за бесконечную рассылку спама, первым, кто подписался на название книги было опубликовано в так называемой «Книге почета».

В начале 2011 года вышла книга!

BARRETT: лучший визуальный спутник жизни Pink Floyd. Сид Барретт

Без названия Сид Барретт.

Я был очень горд, когда открыл книгу и увидел свое имя на «Роллере». среди многих других.

И … там должна была быть выставка! Очевидно, я должен был уйти! я отправился в Лондон, и две супер-подруги заявили, что путешествуют товарищи.

2 марта 2011 г., рано утром, три буйные девушки (30+, но с менталитетом 15-летних подростков, отправившихся на гастроли) попали в самолет в Лондон.В тот же день я стоял лицом к лицу перед картина с черепахой (репродукция позже висит у меня на стене). я стоять в раздумье перед письмами, которые Сид написал своим первым возлюбленным (позже Я бы лучше знал одно из них) и очень ранние фото Pink Floyd … Была мозаика двух воинов, абстрактные работы в красном и синем цвете, маленькие пейзажи акварелью, наброски маленького мальчика тушью …

Мои друзья очень устали через 10 минут, но у них не было связь и восхищение Сидом Барреттом, как и я… Я люблю это а через два дня я вернулся на выставку самостоятельно.

Через Facebook я уже познакомился с Либби Гаусден Чисман, первой любовь.

Она ужасно милая женщина, ей за шестьдесят, но это не удерживает чтобы полностью раскрыть потенциал Facebook. Она с удовольствием получила познакомился со сторонниками «книги Барретта».

Когда она услышала, что я проведу летние каникулы в английском Побережье с моей семьей, она настояла, чтобы мы ее навестили.

После обмена почтовыми адресами и телефонами мы ушли. (муж, ребенок, свекровь — все в двух забитых машинах) в сторону Великобритания.

Либби и Нил (ее муж) жили на маршруте, но я все еще не решался разорили ее место с моей семьей и родителями, тем более что это было около обеда. Я позвонил, чтобы убедиться, и она сказала, что мне не нужно вести себя глупо и что у нее более чем достаточно еды, и что мы должны пройти мимо.

Правдивая история Сида Барретта.

Приехали на место в красивом месте на английском побережье. Мы подъехал к подъездной дорожке, а входная дверь была уже открыта … Я не хочу просто войти, поэтому я позвонил в дверь. Приехала Либби и сказала, что она специально для нас оставила дверь открытой. Я сказал, что это не мудро после инцидента в галерее IG (на второй последний день картина украли, но через два дня вернули по почте).После она нашла кражу очень остроумной и поправила нас, картина была не были украдены, а просто взяты взаймы.

Нас встретили, как старых друзей, и я до сих пор считаю это особенным, поскольку я знал ее только через Facebook. Мы пили кофе в саду (а она была рада, что я курильщик, она считает все эти анти-курительные штуки хлопотами) и арсенал еды, который был еще впереди.

Длинный коридор дома был заполнен произведениями искусства, и некоторые из них Я, конечно, уже видел несколько недель назад.Но в галерее IG Я действительно думал, что это будет разовый опыт … как неправильно Я буду …

Я мог сфотографировать то, что хотел, и она пришла с чемоданом полный букв.

Все эти годы она хранила буквы в черном мешке для мусора, но люди галереи не сочли это достаточно хорошим и сохранили письма для нее в папке и чемодане.

Вы должны знать, что за все эти годы многие поклонники Сида и журналисты подошел к ее полу, и что некоторые документы и фотографии были ‘потерянный’.И все же это не мешает ей продолжать приветствовать люди.

Многие были в ее доме, в том числе писатель Роб Чепмен, который даже работал над своей книгой о Сид в комнате в ее доме. Либби никогда не прочтите его книгу.

Кроме того, я обнаружил, что ее муж Нил был таким же теплым и теплым. нежно к нам. Либ часто говорил, что мы обязаны ему тем, что эти реликвии Сида Барретта все еще там. Он всегда хотел, чтобы она оставила документы даже в те моменты, когда она хотела убрать их.

В 70-х он даже согласился с идеей забрать Сида к себе домой. когда с ним действительно не ладилось. Ее мать положила конец этому потому что она не считала его подходящим для самых маленьких детей пара. Это всего лишь один анекдот из многих, что она мне рассказывала, но из уважение, я не буду помещать их сюда. Она дала понять, что есть еще чем крайности безумия и чрезмерное употребление наркотиков, о которых мы всегда читаем.

Я сидел на полу, скрестив ноги, и она дала мне все эти письма читать а потом настал момент, когда она позвала меня идти вверх по лестнице… Из шкафа в спальне она достала старую черную кожаную куртка. Хотела бы я примерить?

Либби, Ева и куртка.

Die Jacke

Это была кожаная куртка Сида 1962 года!

На балконе старинного английского дома на побережье, с пальмами в сад и шум моря на заднем плане, я носил Syd Пальто Барретта … Ущипни меня!

На мне была куртка своего кумира.Человек, который так много значил для меня. Из конечно не так, как когда мне было 14 лет и я чуть не упал в обморок, как Коэн Wauters от бельгийской рок-группы Clouseau пришла по телевизору (да … у всех есть какие-то юношеские грехи …).

Это другое.

Либби без труда отличит «сидиотов» (ужасное слово) от настоящие фанаты. И именно настоящего фаната она обнимает. «Для нас это было легко, мы знали его, и он был частью нашей жизни.Вы должны были взять немного усилия, слушая его музыку и читая о нем книги «, — она всегда говорит.

В ней также есть небольшой бунт, потому что она часто не соглашается с «Syd Barrett Estate» (который управляет произведениями искусства, письмами, так далее…). Поместье владеет всем, даже если это в ее руках. И Эстейт не любит делиться, но она не против.

Все подходит к концу, мы могли бы остаться на несколько часов, но наша поездка пришлось продолжить.Я встречал нового друга раз в жизни опыт.

А потом…?

Книга вышла.
Я был на выставке.
я был Либби.
Я все видел.

Что теперь…?

К счастью, я не попал в черную дыру!
Я нашел вдохновение для других проекты, вещи, которые мне нужно сделать. У нас в семье был художник, хочу составить карту его работы и карьеры.Это будет долгосрочный проект. у меня тоже есть есть семья и работа, но я как-нибудь справлюсь.

Так к чему все это привело?
Очень много.
Особенно много чего я не могу описать, но они есть.
Сид Барретт всегда в плавании где-то в глубине души.

Спасибо: Либби и Нил, Эй Джей, Алексу, Эми, Андре, Биллу, Феликсу, Игги, Дженни, Джулиан и все вы за то, что были моими друзьями Барретта в Facebook.

Кирстен и Ирма готовы отправиться в поездку.

Свену и Барту за все.

© 2012 Ева Вийкниет. Фотографии любезно предоставлены Либби Гаусден и Евой Вейкниет. Примечания и введение: Святая Церковь Игги Инуита. Перевод ошибки, опечатки и все возможные ошибки полностью ложатся на ответственность Святой церкви Игги-инуитов.
♥ Игги ♥ Либби ♥ Ева ♥

Эта история ранее публиковалась (на голландском языке) по адресу: Pink Floyd Fans Nederland (ведущий — Флойдиан Тео)

Ссылки и обзоры (в Святой церкви Игги Инуитов):
The Seven Возрасты Рока, Часть 2 — Белый Light, White Heat @ Google Video
Выставка «The Idea Generation»: Игги на выставке
«Очень неправильная голова» Роба Чепмена. обзор Теория заговора Биг Барретта
«Темный шар» Джулиана Обзор Palacios: Dark Блог
BARRETT: лучший визуальный спутник жизни отзыва Сида Барретта из Pink Floyd: Барретт: давай, художник!

Прямая ссылка: Ева Вейкниет: мой проект Сида (Роджера) Барретта.Опубликовано 01.09.2012 в 0:37.
Теги: Innerview Либби Гаусден

☮ Дом Случайный верхний ☮ Святой поиск Список тегов ☮ Особенности Ежемесячный индекс Указатель статей ☮

Комментарии Facebook были активированы на этой странице. Если они не отображаются, настройте параметры блокировки рекламы и / или фильтр содержимого отслеживания в своем браузере.

В 2018 году Святая Церковь Игги Инуитов отметила свое десятилетие.
Фото: © Крис Ланавей, 2010 г.

Часто задаваемые вопросы | FAQs

Как установить?

Ознакомьтесь с нашим руководством по установке клейкой пленки здесь.

Можно ли наносить на столешницы из гранита или ламината?

Клейкую пленку можно наносить на непористые, гладкие, плоские поверхности.Мы рекомендуем протестировать пленку в незаметном месте перед установкой, чтобы убедиться, что клейкая пленка подходит для вашей поверхности.

Можно ли наносить на дерево?

Клейкую пленку можно наклеивать на гладкую отделанную древесину. Такие покрытия, как полиуретан и эпоксидная смола, могут быть повреждены при удалении клейкой пленки. Перед установкой рекомендуется провести тестирование в незаметном месте, чтобы убедиться, что клейкая пленка подходит для вашей поверхности.

Можно ли устанавливать на стены?

Хотя его можно использовать на стенах, мы не можем гарантировать, что он не повредит ваши стены, так как это решение должно быть более постоянным, а не временным.

Водонепроницаемость?

Наша клейкая пленка не является водонепроницаемой, но до тех пор, пока на нее не попадает прямая вода, ее можно устанавливать в ванной комнате или на кухне.

Оставляет ли пленка налет?

Клейкая пленка является полуперманентным продуктом и при удалении может оставлять остатки.

Я только что покрасил. Как долго я должен ждать, прежде чем применять WallPops?

После нанесения нового слоя краски следует подождать 3-4 недели перед нанесением WallPops.Это позволяет краске полностью затвердеть, гарантируя, что наклейка на стену не повредит краску и не оставит под ней участки разного цвета при удалении.

Можно ли отрезать этот продукт по размеру?

Да, пленка легко режется ножницами.

Можно ли использовать как фартук?

Хотя это и не по назначению, клеящую пленку можно наносить в качестве защитного покрытия на большинство непористых, гладких, прочных поверхностей. Перед установкой рекомендуется провести тестирование в незаметном месте, чтобы убедиться, что клейкая пленка подходит для вашей поверхности.

Термостойкое?

Клейкая пленка представляет собой тонкий виниловый материал и не подходит для помещений с экстремальными температурами, например, за плитой или у камина.

Антистатические маты отслаиваются и прилипают?

Нет, коврики Anti-Fatigue не отслаиваются и не прилипают.

Из чего сделаны коврики?

Они изготовлены из ПВХ и не токсичны, не содержат фталатов и формальдегидов.

Коврики текстурированные?

Переплетенные напольные плитки имеют эффект тиснения, что придает им легкую текстуру.

Как коврики прилегают к полу?

Хотя нет необходимости прикреплять коврики к полу, если вы хотите добиться нескользящего покрытия ковриков, мы рекомендуем использовать захваты для ковриков FloorPops

Можно ли разместить тяжелую мебель или спортивное оборудование коврик?

Не рекомендуется класть на мат тяжелые предметы, так как они могут оставить постоянную вмятину.

Можно ли класть коврики поверх ковров?

Укладка плитки на ковровое покрытие с низким ворсом обычно нормально, однако мы не рекомендуем использовать их на ковровых покрытиях со средним и высоким ворсом.

Какую обувь я могу носить на коврике?

Туфли с плоским дном лучше всего. Учтите, что туфли на высоком каблуке будут проткнуть поверхность и потенциально оставят вмятины.

Можно ли использовать коврики на улице?

Противоусталостные коврики предназначены только для использования внутри помещений.

Можно ли на ковриках находиться с домашними животными?

Наши коврики достаточно прочные для ежедневного использования и считаются подходящими для домашних животных в зависимости от используемых материалов.Однако ваш питомец может потенциально повредить или поцарапать поверхность в зависимости от своего размера и породы животного.

Могу ли я соединить маты в одном пространстве?

Да, но учтите, что при использовании более одного мата узор может не совпадать.

Можно ли разрезать пенопластовую плитку так, чтобы она укладывалась в углы или в труднодоступные места, чтобы вписаться в комнату?

Да! Плитку из пенопласта можно легко разрезать прямой кромкой или ножницами.

Водонепроницаемы ли коврики? Как их чистить?

Да, они устойчивы к жидкостям, поэтому их можно легко вытереть! Но учтите, что во влажном состоянии коврики могут стать скользкими.

Можно ли чистить коврики пылесосом?

Мы не рекомендуем использовать пылесос для очистки матов из-за силы всасывания, которая может привести к повреждению.

Термостойкие ли соединительные плитки?

Нет, коврики нельзя размещать рядом с источниками тепла или использовать поверх теплого пола.

Предлагаете ли вы образцы?

Нет, мы не предлагаем образцы ковриков против усталости.

Как разровнять коврик?

Противоусталостные коврики повторно отправляются свернутыми, что может привести к скручиванию коврика по прибытии.Мы рекомендуем положить ровную поверхность загнутой стороной вниз, чтобы она стала ровной на ночь.

Они нескользящие?

Коврики Anti-Fatigue устойчивы к скольжению.

Это пена с эффектом памяти?

Нет, коврики Anti-Fatigue не сделаны из пены с эффектом памяти.

Какой толщины у ковриков?

Противоусталостные коврики имеют скошенную кромку 12 мм и имеют толщину около 0,5 дюйма

Как чистить коврик?

Для осторожной очистки ковриков можно использовать мягкое мыло и воду. губка или ткань, не повреждая ее.Для достижения наилучших результатов избегайте использования агрессивных химикатов или пылесосов. Обратите внимание, что после очистки пола под ковриком обязательно просушите пол, прежде чем снова класть коврик. Влага может попасть под коврик и не высохнуть. Продолжительное воздействие влаги или жидкости, застрявшей под ковриком, может вызвать появление плесени или грибка, которые могут повредить некоторые типы напольных покрытий.

Часто задаваемые вопросы о плитке InHome Backsplash

Сколько в одной упаковке?

Одна упаковка плиток бренда InHome содержит четыре листа размером 10 x 10 дюймов.

Можно ли положить их в душ?

Нет, они водонепроницаемы, но не являются водонепроницаемыми и не предназначены для использования в душе.

Водонепроницаемы?

Плитка водостойкая, но не водонепроницаемая. Это означает, что время от времени попадание брызг, например, из раковины или разливов, нормально, а постоянное пребывание в воде (например, в душе) — нет.

Текстурированные?

Да, плитки выполнены в 3D и выглядят так же, как настоящие плитки.Они немного приподняты над линиями «затирки».

Являются ли они постоянными?

Плитку можно снять, отклеив ее, однако, они предназначены для более надежного дизайнерского решения, способного выдержать суровые условия оживленного дома. Это означает, что у них более прочный клей, чем у наших декалей и NuWallpaper, и поэтому при удалении они потенциально могут снять немного краски со стены.

Могут ли они быть размещены поверх существующей плитки?

Плитка Backsplash лучше всего приклеивается при укладке на гладкую плоскую поверхность.По этой причине мы рекомендуем заполнить существующие линии затирки перед установкой поверх существующей плитки.

Можно ли их ставить возле плиты?

Да, но при установке рядом с плитой без подложки оставьте не менее 15 дюймов (38 см) пространства над плитой, чтобы избежать воздействия сильной жары.

Могу я поставить их на камин?

Нет, они не предназначены для размещения непосредственно на источнике тепла. Однако, если это искусственный камин, которым не пользуются, ничего страшного!

Как узнать, сколько заказывать?

Измерьте ширину x высоту областей, которые вы хотите покрыть, в футах (для непостоянных пространств, например, вокруг плиты или шкафа, вам может потребоваться измерить каждое пространство отдельно и сложить вместе).Каждая упаковка занимает около 2,77 квадратных футов, поэтому вы разделите эту общую площадь в квадратных футах на 2,77, чтобы получить минимальное количество необходимых упаковок. Поскольку существует соответствие рисунка, чтобы учесть наклеивание каждого листа плитки рядом друг с другом, мы рекомендуем заказать несколько дополнительных упаковок, чтобы компенсировать совпадение рисунка.

Можете ли вы их очистить?

Да, протрите влажной бумажной салфеткой или тканью.

Их сложно установить?

Наши плитки легко укладываются! Посмотрите пошаговое видео о том, как укладывать наши плитки:

Можно ли их обрезать?

Да, их легко подстричь канцелярским ножом или ножницами.

Можно положить их на пол?

Нет, они не предназначены для использования на полу. Для этого мы рекомендуем FloorPops ™!

Безопасны ли WallPops ™ для комнат в общежитиях, квартирах, съемных квартирах и т. Д.?

Да! WallPops ™ можно снимать и перемещать снова и снова, не повреждая стены и не теряя их способности прилипать. Они идеально подходят для украшения общежитий, квартир или любого другого объекта аренды.

Могу ли я изменить положение WallPops ™? Что делать, если я переезжаю в новое общежитие, квартиру или дом?

Да, конечно! WallPops ™ можно использовать повторно, снимать и перемещать.Чтобы изменить положение WallPops ™, просто снимите их со стены и пригладьте на новом месте.

Чтобы перевезти WallPops ™ в новое общежитие, квартиру или дом, медленно снимите его сверху вниз и приклейте к исходной подложке. Если вы забыли сохранить основу, можно также использовать вощеную бумагу или виниловую прокладку для душа. Это защитит клей и предотвратит образование складок WallPops ™ во время транспортировки. Не складывайте WallPops ™, так как это может вызвать складки. При необходимости вы можете вместо этого катить их.

Можно ли использовать WallPops ™ в ванной?

Если на WallPops ™ не попадает прямая струя воды, WallPops ™ станет отличным дополнением к любой стене ванной комнаты!

Подойдет ли WallPops ™ для текстурированных стен? А как насчет обоев?

WallPops ™ лучше всего работает на гладких плоских поверхностях.

Тем не менее, WallPops ™ можно успешно установить на текстурированные стены, если они не слишком пористые или неровные. У нас были клиенты, которые успешно использовали WallPops ™ на различных поверхностях. Они лучше всего прилипают к окрашенным поверхностям, поэтому, если вы пытаетесь наклеить WallPops ™ на стены с текстурой, бетон или необработанное дерево, у вас будет больше успеха, если поверхность будет окрашена. В целом WallPops ™ отлично приклеивается к плитке, зеркалам, стеклу и обоям.

На каких еще поверхностях я могу использовать WallPops ™?

WallPops ™ можно использовать для украшения самых разных поверхностей, включая:

Бытовая техника: холодильник, стиральная и сушильная машины и т. Д.
Мебель: лестницы, шкафы, двери, картотечные шкафы, книжные шкафы и т. Д.
Прочее: гладкая плитка, зеркала, окна и стекло

Если поверхность гладкая, плоская, сухая и чистая, и не является антипригарной поверхностью, WallPops ™ должен прилипать.

Могу ли я использовать WallPops ™ возле плиты, камина или другого источника тепла?

WallPops ™ следует размещать на расстоянии не менее 15 дюймов (38 см) от плиты, камина или другого сердечного источника, чтобы избежать воздействия тепла на продукт.

Я только что покрасил. Как долго мне следует ждать, прежде чем наносить WallPops ™?

После нанесения нового слоя краски следует подождать 3-4 недели перед нанесением WallPops. Это позволяет краске полностью затвердеть, гарантируя, что наклейка на стену не повредит краску и не оставит под ней участки разного цвета при удалении.

Как чистить WallPops ™?

Если вам нужно очистить WallPops ™, просто протрите его влажной тканью. Нет необходимости в химических чистящих средствах или абразивах, которые могут повредить WallPops.

Могу ли я использовать WallPops ™ на улице? Могу ли я использовать их на своей машине?

Мы не рекомендуем использовать WallPops на улице или в машине. Хотя они могут хорошо работать в течение короткого времени, WallPops ™ не предназначены для использования на открытом воздухе и могут начать тускнеть и шелушиться.

Из чего сделаны WallPops ™?

WallPops ™ не содержат летучих органических соединений, ПВХ и формальдегида.

Как установить FloorPops ™?

Действительно ли FloorPops ™ постоянные / съемные?

Чтобы быть достаточно прочными, чтобы выдерживать пешеходное движение, FloorPops были разработаны с использованием прочного клея.Это означает, что они НЕ являются съемными в том смысле, что наша пленка NuWallpaper ™ или наклейки на стены являются съемными / временными. Однако их можно удалить, если вы захотите — мы рекомендуем использовать скребок или предмет с тонкой плоской поверхностью, чтобы пролезть под шв и поднять угол плитки вверх. Оттуда вы сможете отделить плитку руками. Учтите, что клей прочный, поэтому при установке на окрашенную поверхность FloorPops ™ может приподнять краску. Также возможно, что после удаления FloorPops ™ останутся остатки клея.

Я устанавливаю свои FloorPops ™, и рисунок не совсем совпадает, это нормально?

Вы можете обнаружить небольшие различия в дизайне от плитки к плитке. Этот вариант не должен влиять на общий вид вашего пола. Обязательно поверните плитки для лучшего вида.

Какой толщины у FloorPops ™?

FloorPops ™ имеют толщину 0,06 дюйма (они трехмерные, а не плоские декали).

Можно ли установить FloorPops ™ поверх существующей плитки?

Мы не рекомендуем укладку на плитку, залитую раствором или плавающий деревянный ламинат, так как базовый слой не будет надежным.Если вы выбрали укладку на керамическую плитку или плитку с цементным раствором, мы рекомендуем заполнить все линии затирки тонким раствором для плитки перед укладкой FloorPops на существующую плитку, чтобы создать ровную гладкую поверхность.

Можно ли укладывать на фанерный или бетонный черновой пол?

Можно ли установить FloorPops ™ поверх линолеума?

Не рекомендуется укладывать напольную плитку поверх линолеума.

Можно ли установить FloorPops ™ на плавающий ламинат?

Мы не рекомендуем укладывать FloorPops ™ поверх плавающего ламината.

Водонепроницаемы ли FloorPops ™? Как их чистить?

FloorPops ™ водостойкие. Подождите 5 дней после установки перед очисткой, но по прошествии этих 5 дней вы можете подмести, протереть, пропылесосить или вытереть пыль! Для достижения наилучших результатов используйте средство для чистки виниловых полов и не используйте для очистки чрезмерное количество воды.

Могу ли я использовать FloorPops ™ в качестве фартука?

Мы не рекомендуем устанавливать FloorPops ™ на стены.

Безопасен ли FloorPops ™ / не содержит фталатов?

FloorPops ™ сертифицированы REACH и FloorScore и полностью соответствуют Положению 65 штата Калифорния.

Являются ли FloorPops ™ пожаробезопасными?

FloorPops ™ огнестойкие до 80 ° C / 176 ° F. Их нельзя использовать на полах с подогревом.

Можно ли установить FloorPops ™ вокруг камина?

Из-за опасности возгорания мы не рекомендуем устанавливать FloorPops ™ вокруг работающего камина.

Сколько FloorPops ™ в одной упаковке?

Каждая упаковка FloorPops ™ содержит 10 плиток и занимает площадь 10 квадратных футов.

Как подрезать FloorPops ™ / легко ли их разрезать?

Мы рекомендуем универсальный нож и прямую кромку, но их также легко обрезать ножницами!

Являются ли FloorPops ™ глянцевыми / матовыми / гладкими / текстурированными?

FloorPops ™ имеют слабый блеск и легкую текстуру для обеспечения сцепления.

Могу ли я установить FloorPops ™ снаружи?

FloorPops ™ предназначены только для внутреннего использования.

Могу ли я установить FloorPops ™ в автофургоне?

Нет. Если дом на колесах не контролируется круглый год, плитки, скорее всего, выйдут из строя из-за расширения и усадки из-за сезонных колебаний температуры.

Будете ли вы выпускать больше дизайнов?

Мы всегда стремимся расширять успешные продуктовые линейки — благодаря исключительно положительным отзывам клиентов, мы начинаем процесс разработки будущих дополнений к коллекции FloorPops ™!

Часто задаваемые вопросы о плитках из пеноматериала с блокировкой

Плитки с блокировкой отслаиваются и прилипают?

Нет, пенопласт не отслаивается и не липнет.Они сделаны из нетоксичной пены EVA.

Из чего сделаны коврики?

Изготовлены из нетоксичной пены EVA.

Коврики текстурированные?

Переплетенные напольные плитки имеют эффект тиснения, что придает им легкую текстуру.

Как коврики прилегают к полу?

Хотя нет необходимости прикреплять пенопластовые плитки к полу, если вы хотите добиться нескользкого покрытия матов, мы рекомендуем использовать резиновый коврик под ними для дополнительной безопасности.

Можно ли ставить на коврик тяжелую мебель или спортивное оборудование?

Не рекомендуется класть на мат тяжелые предметы, так как они могут оставить постоянную вмятину.

Можно ли класть коврики поверх ковров?

Какую обувь я могу носить на коврике?

Туфли с плоским дном лучше всего.Учтите, что туфли на высоком каблуке будут проткнуть поверхность и потенциально оставят вмятины.

Можно ли использовать коврики на улице?

Мы не рекомендуем их для использования вне помещений.

Безопасны ли коврики для детей?

Коврики изготовлены из нетоксичной пены EVA, безопасной для детей. Коврики подходят для всех возрастов, но никогда не оставляйте ребенка без присмотра. Всегда используйте под присмотром взрослых.

Можно ли с домашними животными на ковриках?

Безопасен ли FloorPops ™ / не содержит фталатов?

FloorPops ™ сертифицированы REACH и FloorScore и полностью соответствуют Положению 65 Калифорнии.

Могу ли я соединить коврики вместе, чтобы создать большую игровую площадку?

Да! Плитка предназначена для бесшовного создания коврика большего размера.

Можно ли обрезать пенопластовую плитку, чтобы она могла укладываться по углам или в труднодоступных местах, чтобы вписаться в комнату?

Да! Плитку из пенопласта можно легко разрезать прямой кромкой или ножницами.

Водонепроницаемы ли коврики? Как их чистить?

Пенопласты водостойкие, они не впитывают воду, с них можно смывать жидкости. Можно безопасно использовать мягкое мыло и воду, чтобы аккуратно очистить коврики губкой или тканью, не повредив их. Для достижения наилучших результатов избегайте использования агрессивных химикатов или пылесосов.

Можно ли чистить коврики пылесосом?

Являются ли соединительные плитки термостойкими?

Нет, плитку нельзя класть рядом с источниками тепла или укладывать на пол с подогревом.

Предлагаете ли вы образцы?

Нет, мы не предлагаем образцы соединительных плиток.

Как установить NuWallpaper ™ для снятия и наклеивания?

Безопасен ли NuWallpaper ™ для комнат в общежитиях, квартирах, офисах, классах и т. Д.?

Да! NuWallpaper ™ полностью съемный и безопасный для использования в аренде (и других помещениях), не повреждая стены.

Как долго NuWallpaper ™ будет оставаться на стене?

Если вы будете следовать нашим пошаговым инструкциям при нанесении пилинг-клееных обоев, то они смогут прослужить столько, сколько вы захотите!

Могу ли я использовать NuWallpaper ™ в ванной или за кухонной раковиной?

Если вы следуете правильным инструкциям по установке и не подвергаетесь прямому попаданию воды, у вас не должно возникнуть проблем с установкой NuWallpaper в вашей ванной комнате или за кухонной раковиной.При установке в ванной комнате с душем мы рекомендуем позаботиться о том, чтобы сгладить пузырьки воздуха, которые могут возникнуть во время установки.

На каких типах стен можно использовать NuWallpaper ™?

NuWallpaper ™ лучше всего работает на гладких плоских поверхностях. Мы не рекомендуем устанавливать NuWallpaper ™ на

Текстурированные стены
Обои
Кирпич / Шлакоблок
Неокрашенный гипсокартон / гипсокартон или штукатурка
Антипригарная краска
Полы

Мы рекомендуем заказать образец для тестирования перед заказом и установка рулонов, поскольку вы будете устанавливать NuWallpaper ™ на свой страх и риск на любую негладкую / плоскую поверхность.

Могу ли я использовать NuWallpaper ™ на потолке?

Да, если вы следуете инструкциям по правильной установке и ваш потолок будет гладким, плоским, сухим и чистым, NuWallpaper ™ будет держаться.

На каких еще поверхностях я могу использовать NuWallpaper ™?

NuWallpaper ™ можно использовать для украшения самых разных поверхностей, включая:

Бытовая техника: холодильник, стиральная и сушильная машины и т. Д.
Мебель: лестницы, шкафы, двери, картотеки, книжные шкафы и т. Д. .
Прочее: гладкая плитка, зеркала, окна и стекло

Если поверхность гладкая, плоская, сухая и чистая и не является антипригарной, необходимо прилипнуть NuWallpaper ™.

Могу ли я использовать NuWallpaper ™ возле плиты, камина или другого источника тепла?

NuWallpaper ™ следует размещать на расстоянии не менее 15 дюймов (38 см) от плиты, камина или другого сердечного источника, чтобы избежать воздействия тепла на продукт.

Я только что покрасил. Как долго мне нужно ждать перед установкой NuWallpaper ™?

После нанесения нового слоя краски следует подождать 30-60 дней перед нанесением NuWallpaper ™.Это позволяет краске полностью затвердеть, гарантируя, что NuWallpaper ™ не повредит краску при ее удалении.

Как очистить NuWallpaper ™?

Если вам нужно очистить NuWallpaper ™, просто протрите его влажной тканью. Нет необходимости в химических чистящих средствах или абразивах, которые могут повредить продукт.

Могу ли я использовать NuWallpaper ™ вне дома?

NuWallpaper ™ разработан только для использования внутри помещений. Мы не рекомендуем использовать NuWallpaper снаружи, так как он может начать тускнеть и отслаиваться.

Могу ли я повесить произведение искусства на стену после установки NuWallpaper ™?

Да, вы можете повесить произведения искусства на стену после установки, но имейте в виду, что при использовании гвоздя или крючка в обоях появится дыра.

При использовании командного крючка мы рекомендуем вырезать отверстие в NuWallpaper, чтобы командный крючок прилипал непосредственно к стене.

Из чего сделан NuWallpaper ™?

NuWallpaper ™ напечатан на виниловой подложке премиум-класса.

NuWallpaper ™ не содержит летучих органических соединений, фталатов и формальдегидов.

Могу ли я получить образец NuWallpaper ™?

Да, вы можете приобрести образец на нашем веб-сайте, выбрав «Образец — 8 дюймов x 10 дюймов» в раскрывающемся меню элемента и добавив его в корзину.

Могу ли я установить NuWallpaper ™ в автофургоне?

Нет. Если в доме на колесах не будет круглогодичного контроля температуры, NuWallpaper ™, скорее всего, выйдет из строя из-за расширения и усадки из-за сезонных колебаний температуры.

Как установить?

Ознакомьтесь с нашим руководством по установке оконной пленки здесь.

Как снять подложку?

Прозрачную пластиковую подложку можно удалить, вставив под нее ноготь или другой тонкий предмет, аналогично удалению подложки с самоклеящегося продукта.

Можно ли наносить на дерево?

Клейкую пленку можно наклеивать на гладкую отделанную древесину. Такие покрытия, как полиуретан и эпоксидная смола, могут быть повреждены при удалении клейкой пленки.Перед установкой рекомендуется провести тестирование в незаметном месте, чтобы убедиться, что клейкая пленка подходит для вашей поверхности

Съемная ли она? Оставляет ли он остатки?

Да! Чтобы удалить статическую пленку, просто снимите ее с верхнего угла. Нет, он не оставит никаких следов.

Можно ли использовать повторно?

Нет, статическая пленка для окон обычно теряет свои статические свойства после установки на окно или другую поверхность.

Можно ли устанавливать на окна автомобиля?

Нет, из-за резких перепадов температуры, которые могут возникнуть в автомобилях, мы не рекомендуем устанавливать на окна автомобиля.

Подойдет ли это для плексигласа?

• Хотя он не был протестирован, если ваша поверхность гладкая и ровная, и вы следуете инструкциям производителя по установке, все будет в порядке.

Можно ли отрезать этот продукт по размеру?

Да, пленка легко режется ножницами.

Могу ли я использовать это на дверях / окнах душевых?

Поскольку на него не попадает прямая вода, его можно установить в ванной комнате.

Обеспечивает ли это хороший обзор снаружи?

Оконная пленка полупрозрачна и пропускает естественный свет, а также создает уединение.

Как мне стать продавцом WallPops?

Если вы заинтересованы в том, чтобы стать продавцом WallPops, перейдите на нашу страницу контактов, напишите нам по адресу [email protected] или позвоните нам по телефону 781-963-4800 для получения подробной информации.

Остались вопросы?

Позвоните нам по телефону 781-963-4800 или напишите нам по адресу wallpops @ brewp.com

Использование мышей PB-Cre4 для удаления гена мозаики

PLoS One. 2013; 8 (1): e53501.

Андреас Бирбах

Отделение сосудистой биологии, Центр физиологии и фармакологии, Венский медицинский университет, Вена, Австрия,

Вэй Янь, редактор

Отделение биологии сосудов, Центр физиологии и фармакологии, Венский медицинский университет, Вена, Австрия,

Медицинский факультет Университета Невады, Соединенные Штаты Америки,

Конкурирующие интересы: Автор заявил, что конкурирующих интересов не существует.

Поступило 10.10.2012 г .; Принято 29 ноября 2012 г.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего указания автора и источника.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Дополнительные материалы

Рисунок S1: Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских условных аллелей (часть I). Показаны цветные наложения изображений.

(TIF)

GUID: 6FE4B7C6-9F58-4950-9C46-E800AD5A5F9D

Рисунок S2: Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских условных аллелей (часть II). Показаны цветные наложения изображений.

(TIF)

GUID: 09D1E507-E325-4FC9-8227-F7A095AA43F4

Рисунок S3: Различные степени мозаицизма трансгенной печени. Показаны цветные наложения изображений.

(TIF)

GUID: 068B865D-DA1B-407E-AF8C-D4B12B926CAD

Abstract

Экспрессия трансгена с помощью коротких промоторов у трансгенных животных может привести к нежелательным моделям экспрессии трансгена, часто как побочный продукт экспрессии случайной экспрессии кассета в геном хозяина. Здесь я демонстрирую, что часто используемая линия PB-Cre4 (также называемая «Probasin-Cre»), хотя и экспрессируется исключительно в эпителии предстательной железы самцов при передаче через самцов мышей, может приводить к рекомбинации аллелей, фланкированных loxP, в большом разнообразии. тканей при передаче через самок мышей.Эта аберрантная активность Cre из-за экспрессии Cre в ооцитах приводит к различным результатам для аллелей loxP, передающихся от матери или от отца: унаследованные от матери аллели с фланкированием loxP очень эффективно подвергаются рекомбинации, что делает самок мышей PB-Cre4 эффективной моноаллельной «Cre делетерной линией». . Однако отцовские наследуемые loxP-фланкированные аллели неэффективно рекомбинируются материнским PB-Cre4, что приводит к мозаичным паттернам экспрессии у потомства. Эту мозаичную рекомбинацию трудно обнаружить с помощью стандартных подходов к генотипированию многих линий мышей, и поэтому следует предостеречь исследователей, использующих PB-Cre4, об использовании дополнительных подходов для исключения присутствия рекомбинированных аллелей.Однако мозаичная рекомбинация также может быть полезна в подходах с «нокаутом» трансгенных клеток для экспериментов по мозаичной делеции генов.

Введение

Экспрессия трансгена у трансгенных животных часто достигается с помощью короткого промоторного элемента, который в идеале должен ограничивать экспрессию гена в конкретной интересующей ткани. Однако использование этих небольших единиц экспрессии и классической трансгенной техники пронуклеарной инъекции приводит к случайной интеграции единицы в геном. Следовательно, экспрессия трансгена находится под контролем не только короткого промоторного элемента, но и локуса хозяина.Это приводит к аберрантным паттернам экспрессии трансгена во многих трансгенных линиях с экспрессией в тканях, в первую очередь не нацеленных [1]. Использование более крупных конструкций, таких как бактериальные искусственные хромосомы, может помочь контролировать эти эффекты [2]. Для коротких трансгенных конструкций и случайной интеграции часто бывает трудно различить вклад самого промотора, локуса или комбинаторного эффекта промотора в его непосредственном окружении в конкретный паттерн экспрессии трансгена в одной линии.Использование нескольких трансгенных линий и / или клонирование и анализ сайта интеграции могут помочь в объяснении паттерна.

Линия PB-Cre4 была создана для достижения тканеспецифичных делеций гена в эпителии простаты [3]. В этой линии используется хорошо описанный промотор ARR2PB, содержащий проксимальный элемент промотора крысиного Probasin (PB) и две андроген-чувствительные области (ARR), чтобы направлять экспрессию трансгена рекомбиназы Cre в эпителиальных клетках простаты [4].PB-Cre4 использовался во многих исследованиях для достижения рекомбинации / делеции генов в эпителии простаты [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12] , [13]. Линия была тщательно охарактеризована и демонстрирует активность Cre-рекомбиназы в эпителии предстательной железы всех долей простаты мыши и редкую рассеянную рекомбинацию в фиброзно-мышечной строме. Кроме того, ограниченная активность точечного рисунка наблюдалась в клетках семенников и яичников. В этой статье я демонстрирую, что активность в фолликулах ооцитов может быть использована для полной абляции loxP-фланкированного («флоксованного») аллеля, т.е.е. использовать PB-Cre4 в качестве делетерной линии или вырезать флоксированные элементы в мозаичном узоре, в зависимости от материнского или отцовского наследования флоксованного аллеля.

Материалы и методы

Заявление об этике

Содержание и принесение в жертву животных соответствовало директивам Венского медицинского университета и Министерства науки Австрии. Исследование было одобрено этическим комитетом Венского медицинского университета.

Животные

мышей PB-Cre4 [3] (официальная номенклатура штаммов: Tg (Pbsn-cre) 4Prb) были получены из репозитория мышей NCI Frederick и были скрещены более 10 поколений в C57BL / 6JHim (полученный из полученные из когорты Венского медицинского университета в Химберге, Австрия).

ПЦР для генотипирования

Генотипирование проводили на ДНК, выделенной из биоптатов хвоста. Биопсии хвоста (длиной около 2 мм) переваривали в 500 мкл лизирующего буфера (400 мМ NaCl, 0,1% SDS, 2 мМ EDTA, 0,12 мг / мл протеиназы K) в течение 3–24 часов при 58 ° C.Добавляли 200 мкл 5 М NaCl, остатки хвоста осаждали (5 ‘14000 г) с последующим осаждением ДНК из супернатанта добавлением 1 объема изопропанола. Осадок ДНК осаждали (30 ‘14000 г), промывали 70% этанолом, сушили и растворяли в 100 мкл 10 мМ Tris pH8. Для ПЦР использовали 1 мкл этого раствора.

Праймеры для генотипирования Pten были (согласно схеме в): Праймер 1: 5′-GGT AGA CTA GTC GGT ACT CAG-3 ‘, Праймер 2: 5′-CTCCTCTACTCCATTCTTCCC-3′ , Праймер 3: 5′-ACTCCCACCAATGAACAAAC-3 ‘.ПЦР проводили в течение 35 циклов с температурой отжига 55 ° C и временем элонгации 60 дюймов при 72 ° C.

Материнский PB-Cre4 приводит к эффективной рекомбинации материнских передающихся loxP-фланкированных аллелей.

A, схема разведения: самцов мышей дикого типа с двумя аллелями Pten дикого типа (помечены «+») скрещивали с самками мышей, несущих трансген ARR2PB-Cre (линия PB-Cre4) и фланкированный loxP аллель Pten ( «Flox»), а также аллель дикого типа. Ожидаемый результат (изображенный здесь) в отношении статуса потомства Pten будет равным количеству Pten + / + (по одному аллелю дикого типа от отца и матери животного) и Pten flox / + (один дикий тип аллель от отца, один флоксированный аллель от матери) животных.B, Схема аллеля Pten и праймеров (красные стрелки), используемых для их обнаружения. ПЦР с использованием праймеров 2 и 3 дает полосу для аллеля + и большую полосу для аллеля floxed. В случае рекомбинации последовательность между двумя сайтами loxP (синие треугольники) удаляется, что дает дельта-аллель, который может быть обнаружен с помощью ПЦР праймеров 1 и 3. C, примеры ПЦР с различением праймеров 2/3 (слева) между генотипами + / + и flox / + и ПЦР с праймерами 1/3, обнаруживающими дельта-аллели (справа).На левом изображении использовались биопсии хвоста мышей-потомков, где одно родительское животное несло аллель Pten flox и ни одно не несло трансген PB-Cre4, в то время как для правого изображения использовались биопсии хвоста от потомства мышей разведения, указанного в A. использовал. D, У потомков, выращенных в A, комбинация flox / + не была обнаружена, но дельта / + наблюдалась почти в равных количествах, как + / +.

Криосекционирование и микроскопия

Прогулка по геному

Для клонирования вышестоящих последовательностей трансгенной кассеты 2,5 мкг геномной ДНК было расщеплено одним из ряда рестрикционных ферментов с тупым концом (AluI, DraI, SmaI, EcoRV, PvuII) в общем объеме 100 мкл. .ДНК очищали экстракцией фенолом / хлороформом с последующим осаждением этанолом. Адаптеры были следующими: 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGCACGCGTGGTCGACGGCCCGGGCTGGT -3 ‘ и 5′- (PO4) ACCAGCCC (Nh3) -3′, при этом PO4 означает фосфорилирование на 5′-конце и аминирование Nh3′-конца. Адаптеры отжигали, нагревая 1-1 смесь олигонуклеотидов адаптеров до 100 ° C и давая медленно остыть до комнатной температуры. Адаптеры лигировали к расщепленной геномной ДНК с использованием концентрированной ДНК-лигазы Т4 (New England Biolabs).

Первая ПЦР была проведена с праймерами 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3 ‘ (в адапторной последовательности) и 5′- CTAGGCATGGACAATGCCCAATGC-3′ (в ARR2PB) и следующих условиях цикла: 94 ° C 2 ‘, 7 циклов: 94 ° C 25 ″ –72 ° C 3 ′, 32 цикла: 94 ° C 25 ″ –67 ° 3 ′, 67 ° C 7 ′. 1 мкл разведенной (1-50) ПЦР использовали в качестве матрицы для вложенной ПЦР с использованием праймеров 5′-ACTATAGGGCACGCGTG-3 ‘ (внутри адаптера) и 5′-CCCAATGCCTGTCCCATTCTTCAGGCAT-3′ (в пределах ARR2P2PB). и следующие условия цикла: 94 ° C 2 ′, 5 циклов 94 ° C 25 ″ –72 ° C 3 ′, 30 циклов 94 ° C 25 ″ –67 ° C 3 ′, 67 ° C 7 ′.

Сайт интеграции подтвержден праймерами 5′-GAT GAA GCC CAG GTG CCA GTT G-3 ‘(хромосома 11) и 5′-CCC AAT GCC TGT CCC ATT CTT CAG GCA T-3’ (ARR2PB). Температура отжига для этой ПЦР составляла 64 ° C, ПЦР проводили в течение 35 циклов с временем элонгации (при 72 ° C) 90 ″.

Результаты

Материнский PB-Cre4 приводит к полному удалению материнских Loxp-фланкированных аллелей

Моя группа использовала мышей PB-Cre4 для создания модели развития воспалительной опухоли в простате [16].При разведении животных для этой модели мы наблюдали неожиданные фенотипы у подгруппы мышей, включая развитие опухолей в других органах, кроме простаты. Я подозревал, что причиной этих фенотипов является аномальная активность Cre. Было показано, что PB-Cre4 активен в небольшом количестве клеток в яичках (семенные канальцы), а также в яичниках (ооциты) [3]. Чтобы проверить эту гипотезу, я организовал ряд тестовых скрещиваний с использованием линии PB-Cre4 вместе с линией, несущей loxP-фланкированный аллель опухолевого супрессора Pten , который использовался в наших исследованиях.Для анализа генотипа была использована ПЦР, позволяющая отличить нормальный аллель, т.е. аллель «дикого типа» от loxP-фланкированного («флоксованного») аллеля, а также ПЦР, выявляющая вырезанный («дельта») аллель Pten () . При разведении мышей-самцов, несущих PB-Cre4 в дополнение к аллелю Pten flox и аллелю Pten дикого типа, с самками дикого типа, наблюдали нормальное распределение аллеля Pten flox и Pten дикого типа в потомстве. Дельта-аллель не обнаружен (не показан).Однако при скрещивании мышей-самцов дикого типа с самками мышей, несущих трансген PB-Cre4, а также аллели Pten flox и дикого типа, floxed аллель никогда не передавался. Вместо этого часть потомства несла дельта-аллель в биоптатах хвоста (). Это указывает на то, что активность Cre в ооцитах достаточна для индукции рекомбинации. Таким образом, самки мышей PB-Cre4 можно использовать для эффективной делеции наследуемых по материнской линии loxP-фланкированных элементов ДНК. В наших руках эффективность, вероятно, близка к 100% (floxed аллель никогда не был обнаружен), тогда как более ранняя характеристика PB-Cre4 упоминала передачу floxed аллеля примерно в половине случаев.

Материнский PB-Cre4 опосредует мозаичную делецию отцовских LoxP-фланкированных аллелей

Экспрессия PB-Cre4 в ооците приводит к эффективной делеции loxP-фланкированного аллеля, присутствующего в геноме ооцита. При разведении самок мышей PB-Cre4 с активностью Cre ооцита с самцами мышей, несущих loxP-фланкированный аллель, ситуация менее предсказуема, и есть три возможных исхода: во-первых, уровни Cre в оплодотворенных ооцитах недостаточны для опосредования рекомбинации, и loxP -фланговый аллель передается как таковой, дельта-аллель не обнаруживается.Во-вторых, уровень Cre / активность в оплодотворенном ооците достаточен для опосредования рекомбинации, и loxP-фланкированные аллели всегда трансформируются в дельта-аллели. В-третьих, Cre присутствует в оплодотворенном ооците, но уровни находятся в диапазоне, который не всегда приводит к рекомбинации флоксованного аллеля. Вместо этого стохастический процесс Cre-опосредованной делеции имеет место в одной (ых) клетке (ах) многоклеточного раннего эмбриона. В последнем случае это привело бы к мозаичному животному, состоящему из клеток как с нерекомбинированными (объединенными), так и с рекомбинированными (удаленными) аллелями.

Чтобы различить эти возможности, мышей-самцов, несущих аллель Pten flox и Pten дикого типа, скрещивали с самками мышей, несущих PB-Cre4. Я получил мышей с аллелем дикого типа, мышей, несущих аллель floxed или дельта-аллель, и мышей, несущих как floxed, так и дельта-аллель, согласно ПЦР из биопсии хвоста (). Это указывает на то, что действительна третья возможность, и активность Cre ограничена созданием мозаичных животных.

Материнский PB-Cre4 приводит к мозаичной делеции отцовских переданных loxP-фланкированных аллелей.

Мозаицизм можно визуализировать в различных тканях

Чтобы продемонстрировать мозаицизм в ряде тканей и разрешить его на клеточном уровне, а не только в образце ДНК из нескольких клеток, подход к селекции был изменен. Самок мышей PB-Cre4 скрещивали с мышами-самцами, несущими аллель с стоп-кассетой, фланкированной loxP, за которой следовала кДНК, кодирующая EGFP. Эта единица экспрессии находится за повсеместным промотором, что означает, что EGFP экспрессируется в различных тканях после Cre-опосредованной делеции стоп-кассеты.Потомство от этих разводок забивали в молодом возрасте и готовили криосрезы, как описано в методах. Мозаицизм был замечен во всех исследованных органах (,; Рисунок S1, Рисунок S2). Однако обнаружение было затруднено в некоторых типах клеток из-за более низких уровней экспрессии трансгена EGFP. Экспрессия репортерного гена наблюдалась в клетках разного происхождения, таких как эпителиальные клетки почек или кожи, а также клетки гладких или сердечных мышц. Если бы мозаицизм возник в результате рекомбинации одной клетки на многоклеточной стадии, можно было бы ожидать, что дочерние клетки, возникающие из рекомбинированных клеток, образуют группы во взрослой ткани.Этот образец был замечен в таких органах, как печень, почка или легкое, в то время как образцы экспрессии в головном мозге оказались более разбросанными. Это может указывать на миграцию клеток во время развития мозга.

Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских аллелей, которые могут быть визуализированы у репортерных животных (часть I).

A, самок мышей, несущих трансген Cre, скрещивали с самцами мышей, несущих один аллель CAG-loxP-CAT-loxP-EGFP, конструкции, экспрессирующей ген CAT от конститутивного промотора (CAG).Ген CAT фланкирован loxP (треугольники), и после Cre-опосредованной рекомбинации этот аллель будет экспрессировать EGFP. B, разные органы (здесь: печень, почки, кора головного мозга) демонстрируют мозаичную флуоресценцию EGFP у потомства животного из этого разведения. Срезы ткани животного, не экспрессирующего EGFP («нефлуоресцентный»), показаны в качестве контрольных для выделения аутофлуоресценции ткани. Показано, что окрашивание по Hoechst демонстрирует архитектуру ткани. Масштабные линейки, 100 мкм.

Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских аллелей, которые могут быть визуализированы у репортерных животных (часть II).

Органы того же животного, что и на рисунке, демонстрируют мозаицизм в различных тканях. Элементы управления использовались как в. Масштабные линейки, 100 мкм.

Печень была органом с наилучшим соотношением сигнал / шум. Поэтому я решил количественно оценить степень мозаицизма с помощью срезов этого органа от разных мышей. Чуть более половины животных-потомков не проявляли флуоресценции EGFP. Это ожидаемо, поскольку самцы в разведениях несли только один аллель трансгена CAG-loxP-CAT-loxP-EGFP.Флуоресцентные ткани печени (n = 15) показали разную степень мозаицизма. Фракция показала флуоресценцию EGFP только в нескольких клетках на срезе ткани, в то время как я также обнаружил печень с очевидной полной рекомбинацией. Большинство тканей показало промежуточную степень мозаицизма (рис. S3).

Различные степени мозаицизма трансгенной печени.

Цифры над изображениями указывают процент EGFP-положительных клеток (верхний ряд) и количество животных (из n = 15 животных с любой степенью мозаичности, т.е.е. Флуоресценция EGFP) в соответствующей группе (строка ниже). Примеры тканей соответствующих групп показаны под номерами. Масштабные линейки, 100 мкм.

Кассета трансгена ARR2PB-Cre интегрирована близко к теломерному концу хромосомы 11q

Чтобы определить причины аберрантной активности Cre, то есть оценить, была ли экспрессия Cre в ооците обусловлена сайтом интеграции трансгена или промотором, Я попытался определить локус интеграции PB-Cre4.

Вышестоящая последовательность интегрированной конструкции ARR2PB-Cre была клонирована с использованием модифицированной процедуры «прогулки по геному» [17]. Краткое описание метода приведено в (подробности см. В разделе «Материалы и методы»). Он основан на переваривании геномной ДНК различными рестрикционными ферментами, создающих тупые концы и лигировании адаптеров на фрагменты разного размера, с последующей ПЦР и вложенной ПЦР с использованием праймеров внутри адаптеров и исходной последовательности (в данном случае последовательности ARR2PB). Полученные ПЦР-фрагменты секвенировали.Я идентифицировал геномную последовательность на хромосоме 11 мыши (GRCm38: 11: 120521381 (ENSEMBL release 69) согласно номенклатуре ENSEMBL) рядом с трансгенной последовательностью ARR2PB. Этот локус на длинном плече хромосомы 11 (11q) находится близко к теломерному концу. Чтобы проверить этот предполагаемый сайт интеграции, были проведены ПЦР с праймерами, не связанными с процедурой клонирования, чтобы подтвердить связь между локусом хромосомы 11 и последовательностью ARR2PB-Cre (). Очень маловероятно, что второй, независимый сайт интеграции присутствует в этой линии, потому что мышей разводили в нашей лаборатории более 10 поколений, и сайт интеграции согласно ПЦР присутствует у всех протестированных животных, включая самку PB- Мыши Cre4, у которых обнаружен феномен полной или частичной рекомбинации у потомства.

Клонирование сайта интеграции PB-Cre4.

A, схема используемой процедуры прогулки по геному. Геномную ДНК разрезали с использованием резаков для тупых концов с последующим лигированием адаптерных олигонуклеотидов. Вложенную ПЦР проводили с использованием праймеров в адаптерах, а также специфичных для генов праймеров. Ген-специфические праймеры в последовательности ARR2PB примированы дважды из-за двух идентичных андроген-чувствительных областей. Соответствующие результаты для различных резаков с тупым концом показаны в B. Полосы, полученные для SmaI и PvuII, секвенировали.Последовательность для полосы SmaI (стрелка) показана в C. D, праймеры для ПЦР были сконструированы в пределах предполагаемой фланкирующей (восходящей) последовательности и в пределах ARR2PB (снова дважды праймировав), давая двойную полосу, как ожидалось. Полосы снова секвенировали, подтверждая сайт интеграции.

Идентифицированный локус не был описан как экспрессирующийся в ооците или раннем эмбрионе. Я проверил экспрессию генов, ближайших к сайту интеграции, Slc25a10 (митохондриальный носитель) и Gcgr (рецептор глюкагона) in silico.База данных NCBI UniGene EST (метка экспрессируемой последовательности) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/unigene) не обнаружила каких-либо EST для этих генов в оплодотворенной яйцеклетке или яичнике. В базе данных BioGPS (http://www.biogps.org) также не было обнаружено экспрессии в яичнике. Таким образом, аберрантная активность Cre в ооците может быть не связана с локусом интеграции.

Обсуждение

Этот отчет имеет значение на разных уровнях. Во-первых, он демонстрирует полезность, а также ограничения использования PB-Cre4 для делеций генов, специфичных для простаты, и призывает не использовать самок мышей, несущих трансген, для разведения.В частности, в этом отношении важно обнаружение мозаицизма отцовских наследуемых флоксированных аллелей. В следующем примере подчеркивается причина этого предупреждения: Большинство трансгенных разводов контролируется методом ПЦР, различающим аллель «дикого типа» и «флоксованный». Хотя полная делеция, как и в случае наследуемых от матери аллелей, фланкированных loxP, будет обнаружена через некоторое время из-за отсутствия полос ПЦР для этих аллелей, мозаичная делеция не обнаружится. В случае мозаицизма аллели дикого типа и флоксированные будут присутствовать в потомстве в примерно правильных соотношениях, в то время как удаленный («дельта») аллель обычно не проверяется при генотипировании.Таким образом, потомству приписывается генотип дикого типа или флоксированный генотип определенного аллеля, в то время как, кроме того, он несет мозаичную делецию, которая может вызывать фенотип. Теоретически это может привести к отнесению определенного фенотипа простаты к делеции эпителиального гена, в то время как фенотип возникает только из-за (дополнительной) мозаичной делеции в фиброзно-мышечной строме или инфильтрации иммунных клеток. Поэтому рекомендуется, чтобы исследователи, использовавшие PB-Cre4 в своей работе и не обратившие внимания на передачу гена Cre только от самцов животных при разведении, пересмотрели свои выводы в этом отношении.Однако следует отметить, что PB-Cre4, когда он передается только мужчинами, является безопасным и точным способом достижения делеции гена, специфичного для простаты, как в моих руках, так и в многочисленных литературных отчетах. В случае, если требуется передача от партнеров по размножению как самцов, так и самок, например при проведении сложных множественных трансгенных животных рекомендуется использовать одну из индуцибельных простат-специфичных линий Cre [18], [19]. Было показано, что эти линии специфичны для эпителия и поэтому обладают дополнительным преимуществом по сравнению с PB-Cre4.Еще одним ценным в этом отношении штаммом является линия PSA-Cre [20].

Во-вторых, открытие, что материнский PB-Cre4 приводит к мозаичной делеции отцовских флоксовых аллелей, в то же время полностью удаляя материнские флоксовые аллели, полезно для трансгенных исследований. Изучение мозаичных паттернов делеций с использованием репортерных генов, начатое в этом исследовании, может быть интересно для биологии развития при изучении вклада клеток ранних эмбрионов во взрослые ткани, а также при изучении миграции клеток во время развития.Мозаичная делеция также может быть полезна для экспериментов с классической делецией («нокаутом») генов. Например, если исследователь хочет изучить интересующий ген ( Gene A ) в нескольких тканях взрослого человека, а полная делеция гена ( Gene A — / -) является смертельной для эмбриона, исследователь может захотеть рассмотреть мозаичное удаление floxed аллель поверх гетерозиготного ( Gene A +/-) фона. Это могло бы избежать эмбриональной летальности и позволить изучать функцию генов в нескольких тканях без необходимости в нескольких тканеспецифичных линиях Cre.

В-третьих, идентификация сайта интеграции PB-Cre4 имеет значение для пользователей этой линейки. Хотя сайт интеграции не находится в локусе, известном для экспрессии в ооците или раннем эмбрионе, нельзя исключать, что интеграция промотора в микроокружение создает сайты связывания для активаторов транскрипции, активных в ооците. Более того, все еще возможно, что сам промотор ARR2PB приводит к экспрессии в фолликулах яичников, хотя трансгенные мыши ARR2PB-CAT не проявляют активности репортерного гена в яичнике [4].В той же статье показано, что промотор ARR2PB активируется не только рецептором андрогена, но и другими ядерными рецепторами, такими как рецептор глюкокортикоидов. Возможно, что активность ядерного рецептора в ооците приводит к экспрессии промотора. Ограниченные уровни экспрессии в небольшом количестве клеток, таких как ооциты в яичнике, может быть трудно обнаружить, но все же достаточны для индукции Cre-опосредованной рекомбинации. Сайт интеграции на хромосоме 11 (GRCm38: 11: 120,521,381) также имеет значение для биаллельной делеции гена с помощью PB-Cre4: из-за генетической связи гены с локусами, близкими к сайту интеграции, будут демонстрировать сниженную эффективность разведения (т.е. вероятность подходящего события кроссинговера) у сложных мышей с loxP-фланкированными аллелями для этих генов и PB-Cre4. Например, этот сайт находится примерно в 20 мегабазах от локусов Stat3 и Stat5 , двух хорошо известных сигнальных генов рака. Локус для Socs3 , также вовлеченного в рак простаты, находится всего в 2 мегабазах от сайта интеграции. Учитывая, что 1 сантиморган примерно соответствует 1 мегабазе в геноме мыши, эффективность для хромосомы, несущей в потомстве как PB-Cre4, так и Socs3 flox, будет всего 2%.

В заключение, значение представленных результатов можно резюмировать в трех коротких утверждениях:

PB-Cre4 будет добросовестно поддерживать делецию гена, специфичного для простаты, только при передаче через самцов животных; передача через самки животных вызывает полную или мозаичную делецию, которую можно легко упустить из виду при использовании обычных стратегий генотипирования.
Мозаичная делеция гена отцовски переданных loxP-фланкированных аллелей материнским PB-Cre4 может быть полезным инструментом для экспериментов по делеции генов и биологии развития.
Сайт интеграции трансгена следует учитывать при нацеливании на аллели, близкие к сайту интеграции.

Дополнительная информация

Рисунок S1

Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских условных аллелей (часть I). Показаны цветные наложения изображений.

(TIF)

Рисунок S2

Материнский PB-Cre4 приводит к мозаицизму отцовских условных аллелей (часть II). Показаны цветные наложения изображений.

(TIF)

Рисунок S3

Различные степени мозаицизма трансгенной печени. Показаны цветные наложения изображений.

(TIF)

Благодарности

Я хочу поблагодарить Дэвида Эйзенбарта, Еву Ладенхаф и Уолтера Хубера за помощь в генотипировании. Спасибо анонимным рецензентам за их критическую оценку рукописи.

Отчет о финансировании

Эта работа финансировалась за счет гранта Австрийского научного фонда FWF (проект № P21919-B13).Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Список литературы

1. Houdebine LM (2002) Способы получения трансгенных животных и контроля экспрессии трансгена. J Biotechnol 98: 145–160. [PubMed] [Google Scholar] 2. Giraldo P, Montoliu L (2001) Размер имеет значение: использование YAC, BAC и PAC у трансгенных животных. Трансгенный Res 10: 83–103. [PubMed] [Google Scholar] 3. Wu X, Wu J, Huang J, Powell WC, Zhang J и др.(2001) Создание модели трансгенной мыши Cre, специфичной к эпителиальным клеткам предстательной железы, для абляции тканеспецифического гена. Механический Дев 101: 61–69. [PubMed] [Google Scholar] 4. Zhang J, Thomas TZ, Kasper S, Matusik RJ (2000) Небольшой составной промотор пробазина обеспечивает высокие уровни экспрессии генов, специфичных для простаты, посредством регуляции андрогенами и глюкокортикоидами in vitro и in vivo. Эндокринология 141: 4698–4710. [PubMed] [Google Scholar] 5. Тротман Л.С., Ники М., Дотан З.А., Кутчер Дж. А., Ди Кристофано А. и др.(2003) Доза Птен определяет прогрессирование рака простаты. PLoS Biol 1: E59. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Ван С., Гао Дж., Лей К., Розенгурт Н., Притчард С. и др. (2003) Простат-специфическая делеция гена супрессора опухоли Pten мыши приводит к метастатическому раку простаты. Раковая клетка 4: 209–221. [PubMed] [Google Scholar] 7. Kelavkar UP, Parwani AV, Shappell SB, Martin WD (2006) Условная экспрессия человеческой 15-липоксигеназы-1 в простате мыши индуцирует интраэпителиальную неоплазию простаты: модель мыши FLiMP.Неоплазия 8: 510–522. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Zhou Z, Flesken-Nikitin A, Corney DC, Wang W, Goodrich DW и др. (2006) Синергия дефицита p53 и Rb в условной мышиной модели метастатического рака простаты. Рак Res 66: 7889–7898. [PubMed] [Google Scholar] 9. Мэддисон Л.А., Сазерленд Б.В., Барриос Р.Дж., Гринберг Н.М. (2004) Условная делеция Rb вызывает рак простаты на ранней стадии. Рак Res 64: 6018–6025. [PubMed] [Google Scholar] 10. Francis JC, McCarthy A, Thomsen MK, Ashworth A, Swain A (2010) Дефицит Brca2 и Trp53 взаимодействует в прогрессировании опухолевого процесса простаты у мышей.PLoS Genet 6: e1000995. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Pearson HB, Phesse TJ, Clarke AR (2009) Передача сигналов K-ras и Wnt синергетически ускоряет онкогенез простаты у мышей. Рак Res 69: 94–101. [PubMed] [Google Scholar] 12. Bruxvoort KJ, Charbonneau HM, Giambernardi TA, Goolsby JC, Qian CN и др. (2007) Инактивация Apc в простате мышей вызывает карциному простаты. Рак Res 67: 2490–2496. [PubMed] [Google Scholar] 13. Wu X, Xu K, Zhang L, Deng Y, Lee P и др.(2011) Дифференциация протокового эпителия и гладких мышц в предстательной железе регулируется Notch / PTEN-зависимым механизмом. Дев Биол 356: 337–349. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 14. Сузуки А, Ямагути МТ, Охтеки Т, Сасаки Т, Кайсё Т и др. (2001) Т-клеточная потеря Pten приводит к дефектам центральной и периферической толерантности. Иммунитет 14: 523–534. [PubMed] [Google Scholar] 15. Кавамото С., Нива Х., Таширо Ф., Сано С., Кондо Дж. И др. (2000) Новый репортерный штамм мышей, который экспрессирует усиленный зеленый флуоресцентный белок после Cre-опосредованной рекомбинации.FEBS Lett 470: 263–268. [PubMed] [Google Scholar] 16. Бирбах А., Эйзенбарт Д., Козаковски Н., Ладенхауф Е., Шмидт-Супприан М. и др. (2011) Устойчивое воспаление приводит к пролиферативной неоплазии и потере гладкомышечных клеток в модели опухоли простаты. Неоплазия 13: 692–703. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17. Зиберт П.Д., Ченчик А., Келлог Д.Е., Лукьянов К.А., Лукьянов С.А. (1995) Усовершенствованный метод ПЦР для ходьбы в неклонированной геномной ДНК. Нуклеиновые кислоты Res 23: 1087–1088. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.Birbach A, Casanova E, Schmid JA (2009) Probasin-MerCreMer BAC позволяет индуцибельную рекомбинацию в простате мыши. Бытие 47: 757–764. [PubMed] [Google Scholar] 19. Ratnacaram CK, Teletin M, Jiang M, Meng X, Chambon P и др.